Kit de détection de l'activité alpha - cétoglutarate déshydrogénase micromethod

α-Kétoglutarate déshydrogénase (α-KGDH) Instructions pour kits de détection d'activité
Méthode des traces
Remarque: les réactifs de ce produit ont changé, veuillez noter et suivre strictement cette instruction.
RéférencePour:BC0715
spécificationPour:100T/96S
Composition du produit: Veuillez vérifier soigneusement si le volume de réactif correspond au volume contenu dans la bouteille avant utilisation, en cas de doute, veuillez contacter le personnel de solebao à temps.

Formulation de la solution:

1. Réactif II: est un réactif volatil, scellé dès que possible après utilisation, - 20 ℃ pour la conservation;

2. Réactif V: prendre 1 bâton de réactif V avant utilisation, ajouter1Ml réactif trois, bien dissous, avec des réactifs incomplets2 - 8℃sauvegarder4Semaines;

3. Réactif six: prendre 1 bâton de réactif six avant utilisation, ajouter1.5Ml réactif trois, bien dissous, avec des réactifs incomplets- 20 ℃ sous - assemblage Conservation4Semaines, évitez le gel et la dégel répétés;

4. Réactif VII: prendre 1 bâton de réactif VII avant utilisation, ajouter1Ml réactif trois, bien dissous, avec des réactifs incomplets- 20 ℃ sous - assemblage Conservation4Semaine, éviter la congélation et la dégel répétés (à faire après la dissolution de 1 bâton de poudre100TPour une utilisation prolongée, ce produit donne plus1Poudre);

5. Réactif VIII: prendre 1 bâton de réactif VIII avant utilisation, ajouter0,4 mlEau distillée, bien dissoute, avec des réactifs incomplets-20℃Sous - assemblage Conservation4Semaines, évitez le gel et la dégel répétés;

6. Formulation du liquide de travail: prendre successivement avant utilisation 8,05Ml de réactif III,0.2 mLRéactif IV, 1mLRéactif v.1.25mLRéactif VI, 0,5mLRéactif sept(au total11mL, environ55T) etEntièrement mélangé à utiliser, maintenant utilisé.

Description du produit:
α-KGDH(EC 1.2.4.2), largement présent dans les mitochondries des animaux, des microorganismes végétaux et des cellules en culture, est l'une des enzymes clés de la régulation du cycle de l'Acide tricarboxylique, catalyséeα-Décarboxylation oxydative de l'acide cétoglutarique en Succinyl - adjuvant *A- Oui.
α-KGDHCatalyseα-Acide cétoglutarique,NAD^{Le +}Et adjuvant * a produit succinyl adjuvant *A, CO2 etNADH,NADHDans340 nmPic d'absorption caractéristique, pourNADHReprésentation du taux de générationα-KGDHActivité.

Remarque: Avant l'expérience, il est recommandé de sélectionner 2 à 3 échantillons avec de grandes différences attendues pour la pré - expérience. Si les valeurs d'absorption lumineuse de l'échantillon ne sont pas dans la plage de mesure, il est recommandé de diluer ou d'augmenter la taille de l'échantillon pour la détection.
Instruments et fournitures à apporter:
Spectrophotomètre UV / étalon enzymatique, bain - Marie/Incubateur thermostatique, centrifugeuse de table, pipette réglable, boîte colorimétrique à traces de quartz/ 96trouUVPlaques, mortier/Homogénateur, glace et eau distillée.
Étapes opérationnelles:Les étapes opérationnelles spécifiques sont détaillées dans l'annexe « fiche produit ».

1. Tous les réactifs et les échantillons sont placés sur la glace pendant le test afin de ne pas les dénaturer et les désactiver.

2. La température du liquide réactionnel dans la cuve doit être maintenue à 37°c ou25℃Prendre un petit bécher pour charger une certaine quantité de37℃ou25℃Eau distillée, mettre ce bécher dans37℃ou25℃Dans un bain - Marie. Placer la boîte colorimétrique avec le liquide réactionnel dans ce bécher pendant la réaction.

3. Il est préférable que deux personnes fassent cette expérience en même temps, une personne colorimétrique et une personne chronométrée pour garantir la précision des résultats de l'expérience.

4. Détermination du tubeΔALa valeur est dans0,01 - 0,25Entre, si le tube est déterminéΔAValeur supérieure à0.25L'échantillon doit être dilué.

5. Étant donné que l'extrait contient une certaine concentration de protéines (environ 1 mg / ML), la teneur en protéines de l'extrait lui - même doit être soustraite lors de la détermination de la concentration en protéines de l'échantillon.

Exemples expérimentaux:

1. Prendre 0,1 g d'argile pour le traitement de l'échantillon, sera prélevé après dilution 2xSuivez les étapes de détermination, mesurée à l'aide d'une boîte colorimétrique à traces de quartzcalculΔADétermination=A4-A3=0.3243-0.3115=0.0128,ΔAvide=A2-A1=0，Calcul de la vie de l'enzyme par la masse de l'échantillon:

α-KGDHActivité(U / G masse)= 1488,5×(ΔA)Détermination-ΔAvide÷W×2(multiples de dilution)=381.056 U/gQualité.

1. Prélever 0,1 g de foie de souris pour le traitement de l'échantillon,4 ℃ 11000g centrifugé10 minutesAprès le nettoyageSuivez les étapes de détermination, mesurée à l'aide d'une boîte colorimétrique à traces de quartzcalculΔADétermination=A4-A3=1.2123-0.9623=0.2500,ΔAvide=A2-A1=0，Calcul de la vie de l'enzyme par la masse de l'échantillon:

α-KGDHActivité(U / G masse)= 1488,5×(ΔA)Détermination-ΔAvide÷W = 3721,25 U/gQualité.
Littérature publiée pertinente:

1. Jianyun Yue, Changjian Du, Jing Ji, et al. Inhibition de L'activité de l'α-cétoglutrate déshydrogénase affecte la croissance racinale peuplier via changements dans Le shunt GABA. Planta. juillet 2018; (IF3.06)

2. Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, et al. lncRNA Ftx favorise la glycolyse aérobie et la progression tumorale par la voie PPARγ dans le carcinome hépatocellulaire. Journal international d'oncologie. mai 2018; (IF3.571)

Références:
Park L C H, Calingasan N Y, Sheu K F R, et al. Quantitative activity α-ketoglutarate dehydrogenase coloration in brain sections and in cultured cells [J]. Biochimie analytique, 2000, 277(1): 86-93.
Série de produits connexes:
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