Interleukine de souris - 1β

Kit ELISA Interleukine - 1β de souris

Introduction au contextePour:

L'il - 1 est divisée en il - 1a, il - 1β, deux gènes de l'il - 1 humaine et Murine localisés sur le Chromosome 2, tous deux contenant sept Exons. Le précurseur de l'il - 1 (proil - 1) est de 31 kDa et forme une molécule d'il - 1 mature par lyse enzymatique protéolytique. Il - 1 a une homologie plus élevée dans différents genres. Au niveau des acides aminés, l'il - 1α et l'il - 1β sont respectivement de 60 à 70% et de 75 à 78% d'homologie dans différents genres; Il - 1α et il - 1β ont un poids moléculaire d'environ 17,5 kDa, des points isoélectriques de 5 et 7 respectivement et une homologie de 28%.L'il - 1β Murine mature de 17 kDa a une identité de séquence d'acides aminés de 90% avec l'il - 1β de souris et de rats de coton et de 65% à 78% avec l'il - 1β de chiens, de chevaux, de chats, d'humains, de porcs et de singes.

Il - 1β est principalement produit par les monocytes et les macrophages dans le sang, les astrocytes, les oligodendroglies, les corticosurrénales, les cellules NK, les cellules endothéliales, les kératinocytes, les mégacaryotes, les plaquettes, les neurones, les neutrophiles, les ostéoblastes, les cellules de xuwang, les cellules trophoblastiques, les cellules T et Les fibroblastes peuvent également produire il - 1β. L'il - 1 a un large éventail d'effets immunomodulateurs et a des effets thermogéniques et médiés sur l'inflammation- Oui.

Principe de détectionPour:

Solarbio (Solarbio ®)Kit ELISA avec technologie de détection immunoadsorbante enzymatique basée sur la méthode sandwich à double anticorps- Oui.Sera résistantSourisIL-1bêtaLe package d'anticorps monoclonal est placé sur une plaque d'étalonnage enzymatique; Ajouter Gradient dilué étalon et échantillon pré - dilué séparément, étalon et échantillonSourisIL-1bêtaSera anticorps avec des paquets sur la plaque d'enzymeSuffisanteCombinaison;Après le lavage de la plaqueAjouter un anti - biotinyléSourisIL-1bêtaAnticorpsL'anticorps serait emballé avec des plaques pour les normes capturées par l'anticorps et les échantillons de souris il - 1bêtaUne liaison spécifique se produit; Après le lavage de la plaqueAjouter la streptavidine marquée à la peroxydase de raifort (HRP), la biotine et la streptavidine se produisentNon Covalent à haute intensitéCombinaison;Après le lavage de la plaqueAjouter le substrat chromogène TMB，Si différentes concentrations de l'échantillon dans les puits de réaction sont présentesSourisIL-1bêtaLe HRP transformera le TMB incolore en une substance bleue de différentes nuances (corrélation positive), et les pores de réaction deviendront jaunes après l'ajout du liquide de terminaison; Après cela, à λ max = 450 nm(OD = 450 nm)Détermination de l'Absorbance de l'échantillon dans le trou de réaction(OD), dans l'échantillonSourisIL-1bêtaConcentration etODProportionnel, il peut être calculé en dessinant des courbes standard et un logiciel d'ajustement à quatre paramètresSortirDans l'échantillonSourisIL-1bêtaLa concentration.

Schéma de principe:

Précautions:※※※

• Le kit doit être utilisé pendant la période de validité, veuillez ne pas utiliser de réactifs périmés.
• Le kit doit être conservé à 2 - 8 lorsqu'il n'est pas utilisé℃ réfrigérateur, a été remis en solutionmaisLes standards non utilisés, jetez - les.
• Kit avant utilisationS'il vous plaîtRécupération à température ambiante 30 min，Et bien mélanger les différents composants de la boîte de réactif etPréparéL'échantillon.
• Dans l'essai, les étalons et les échantillons sont recommandés pour la détection des pores et l'ordre dans lequel les réactifs sont ajoutés doit être maintenu *.
• Pour éviter la contamination croisée, utilisez le tube sexuel 1 fois dans l'essai, tête de pistolet，Film de scellement（※) etEt des conteneurs en plastique propres..
• Moins de volume d'anticorps biotinylés concentrés et de conjugués enzymatiques concentrés, des traces de liquide peuvent s'infiltrer dans la paroi du tube et la bouteille pendant le transport

Sur le couvercle, avant l'utilisation, s'il vous plaît centrifuger le traitement (5 - 10 s est OK), de sorte que le liquide sur la paroi du tube se concentre sur le fond du tube, lors de l'utilisation, s'il vous plaît souffler soigneusement plusieurs fois avec une pipette.

• En plus du liquide de lavage concentré dans le kitetLiquide de terminaison peut être générique en dehors, s'il vous plaît ne pas utiliser d'autres sources kitsRéactifs inclusAu lieu d'un composant unique dans ce kit.
• Pour garantir des résultats précis, chaque détectionbesoinFaites la courbe standard.

Conseils de sécurité:Le liquide de terminaison dans le kit est une solution acide,Les opérateurs sont enLors de l'utilisationS'il vous plaîtApportez des gants et faites attention à la protection;Aussi pendant le fonctionnementÉvitez le contact du réactif avec la peau et les yeux, en cas de contact accidentel, lavez - le abondamment à l'eau claire; Lors de l'analyse d'échantillons de sang et d'autres liquides corporels, veuillez respecter les règles de sécurité et de protection des laboratoires biologiques nationaux.

Composition et stockage des kitsPour:

Équipement expérimental autonome (non disponible, disponible en remplacement)

• étalonneur enzymatique (longueur d'onde principale 450 nm, longueur d'onde de référence 630 nm)
• Pipette de haute précision et tête d'aspiration jetable: 0,5 - 10,2 - 20,20 - 200200 - 1000μl
• Machine à laver les plaques ou à laver les bouteilles
• 37℃IncuberYooBoîte
• Double vapeur d'eau, eau désionisée, cylindre de mesure, etc.
• Tubes à essai en polypropylène pour dilution

Collecte et stockage des échantillons:

• Culture cellulaire supérieure:

Déplacement du milieu cellulaire dans un tube de centrifugation stérile, 1000 à 4 ° C×G centrifuger pendant 10 min, puis charger la partie supérieure égale dans un petit tube EP et2Conservation à 0°C(la détection dans les 24 heures peut être placée dans 2 - 8 ℃ stockage)Évitez le gel et la dégel répétés.

• échantillons de sérum:

Après 20 min de coagulation naturelle du sang à température ambiante 1000 à 4°C×G centrifuger pendant 10 min, puis charger la partie supérieure égale dans un petit tube EP et2Conservation à 0 ℃ (détection dans les 24 heures peut être mis dans le stockage 2 - 8 ℃), s'il y a un précipité pendant la conservation, s'il vous plaît centrifuger à nouveau pour éviter la congélation et la dégel à répétition.

• échantillons de plasma:

Le sang total est recueilli dans un tube contenant un anticoagulant, l'EDTA est sélectionné en fonction des besoins réels du spécimen, le citrate de sodium ou l'héparine comme anticoagulant, mélangé pendant 20 min, à 4°C 1000×G centrifuger pendant 10 min, puis charger la partie supérieure égale dans un petit tube EP et2Conservation à 0 ℃ (détection dans les 24 heures peut être mis dans 2 - 8 ℃ stockage), éviter le gel et la dégel répétés- Oui.

※Attention:Échantillons de plasma sérique Évitez d'utiliser des échantillons hémolytiques et hyperlipidiques afin de ne pas affecter les résultats des tests;Si dans l'échantillonCiblesLa concentration de détection est supérieure à la valeur élevée de la norme, s'il vous plaît faire l'échantillon pour le multiple approprié après la dilution, il est recommandé de faire une pré - expérience avant l'expérience formelle pour déterminer le multiple de dilution.

Préparation des réactifsPour:

• Retour au chaud du réactif: 30 min avant l'expérienceKits,À mesureréchantillonPlacé enTempérature ambianteEn bas, concentré liquide de lavage si cristallisation, s'il vous plaît mettre dans un bain chaud à 37 ℃ jusqu'à ce que les cristaux sont tous dissous- Oui.
• FormuléLiquide de lavage:Pré - calculer le volume d'utilisation du liquide de lavage après une bonne dilution, puisAvec de l'eau bi - vapeur ou désionisée sera20 foisLiquide de lavage concentré dilué en1 foisLiquide d'application, liquide de lavage concentré non utilisé mis en4℃Réfrigérateur à conserver.

3. Produits standardDilution de gradientPour:Rejoindre les standards /échantillonDilution (Sà R1)1 mlDans les standards lyophilisés, laisser reposer 15 minutes pour les * dissoudre et mélanger doucement (la concentration est2000pg/ml)， PuisselonLes concentrations suivantes:2000,1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 0 pg / ML pour la dilution. Liquide brut de standard redissous (2000 pg/ml)Les quantités non utilisées doivent être abandonnées ou divisées selon les besoins en une seule fois et stockées au réfrigérateur à - 20 ~ - 80 ° C,Spécifique comme suitFigure- Oui.

4. Fluide de travail pour anticorps biotinylés:Bien calculé à l'avanceQuantité requise pour l'essai, avec diluant de détection (Set R2)100 fois concentré d'anticorpsDilutionAppliquer le liquide de travail 1 fois (Bien mélanger avant dilution) et，S'il vous plaîtDans les 30 minutesAjouter dans les puits de réaction.

Liquide de travail anticorps biotinylé spécifiqueMéthode de dilutionComme suit:

5. Liquide de travail conjugué enzymatique: formulé dans la quantité requise pour chaque essai, dilué avec le conjugué enzymatique (SR3) diluer 100 fois le conjugué enzymatique concentré enApplication 1xLiquide de travail（Avant dilutionCentrifugation)S'il vous plaît utiliser dans les 30 minutes- Oui.

Liquide de travail spécifique de conjugué enzymatiqueMéthode de dilutionComme suit:

6. Méthode de lavage:

• Plaque de lavage automatique: jeter le liquide dans les trous de la plaque de marquage enzymatique, sécher sur du papier absorbant épais, injecter le liquide de lavage est 300 µl / puits, l'intervalle entre l'injection et l'aspiration est de 30 secondes et la plaque est lavée 5 fois.
• Laver la plaque à la main: jeter le liquide dans le trou de la plaque de marquage enzymatique, sécher sur du papier absorbant épais, ajouter le liquide de lavage avec une bouteille de lavage 300µl / puits, après 30 secondes de repos, le liquide est vidé des puits de la plaque de marquage enzymatique, séché sur du papier absorbant épais et lavé 5 fois.

Étapes de détection:

Jugement des résultatsPour:

1. Détermination de la valeur od avec un étalon enzymatique à une longueur d'onde de 450 nm. Choisissez la détection à double longueur d'onde avec une longueur d'onde de référence de 630 nm. Si vous ne pouvez pas effectuer la détection à double longueur d'onde, utilisez 450 nmODDétermination de la valeurMoins630 nm deODDétermination de la valeur.

2. Calculer la valeur od moyenne des étalons, échantillons: la valeur od de chaque étalon et échantillon doit être diminuée de la valeur od du trou zéro

3. Avec la concentration standard en abscisse, la valeur d'Absorbance od en ordonnée, dessiner la courbe standard avec le logiciel, échantilloncentreIL-1bêtaLe contenu peut être passéCorrespondantLes valeurs de do sont converties par des courbes standard pour les concentrations correspondantes.

4. Si la valeur od du spécimen est supérieure à la limite supérieure de la courbe standard, elle doitfaireAprès dilution appropriéeRe - détection, multiplié par le multiple de dilution lors du calcul de la concentration- Oui.

Caractérisation des paramètresPour:

1. Données et courbes standard

Cette figure est à titre indicatif seulement et doit être calculée en courbes standard tracées par les étalons d'essaiSourisIL-1bêtaContenu de l'échantillon

2. Sensibilité:

Faible détectableSourisIL-1bêtaConcentration jusqu'à15en pg/ml,

La moyenne de 20 concentrations de standard zéro OD, plus deux écarts - types, calcule les concentrations détectables correspondantes.

3. Spécificité:

Non avecSourisIL-2、3,4, 6,7, 10IL-1a et IL-1RaRéactions égales

4. Répétabilité:

Intraplaque, coefficient de variation interplaque < 10%

5. Taux de recyclage:

Dans la sélectionSantéSourisPlasma sanguinCulture cellulaireAjouter 3 niveaux de concentration différentsSourisIL-1bêta, calculer le taux de récupération.

6. Dilution linéairePour:

Respectivement dans la sélection4 SantéPlasma et cultures cellulaires de sourisAjouter une forte concentrationSourisIL-1bêta, la dilution est effectuée dans la plage cinétique de la courbe standard, la linéarité est évaluée.

RéférencesPour:

1Dinarello, C.A. (1994) Eur. Cytokine Netw.5: 517.

2March, C.J. et al. (1985) Nature315:: 641.

3. Sims, J.E. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA86: 8 946.

4. Sims, J.E. et al. (1988) Science241: 585.

5Huang, J. et al. (1997) Proc. Natl. Académique. Sci. États-Unis94: 12 829.

6. Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Chem.272: 7 727.

7. Sims, J.E. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA90: 6 155.

8Giri, J. G. et al. (1994) J. Immunol.153: 5 802.

9Symons, J. A. et al. (1995) Proc. Natl. Académique. Sci. États-Unis92: 1714.

10Wewers, M.D. et al. (1997) J. Immunol.159: 5 964.

11Gonzales-Hernandez, J.A. et al. (1995) Clin. Exp. Immunol.99: 137.

Questions fréquemment posées et solutionsPour:

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