Détection immunohistochimique multifluorescente

　　Détection immunohistochimique multifluorescenteLe principe technique principal est dérivé de la technologie TSA (Tyramide signal amplification). La TSA est une méthode de détection enzymologique utilisant la peroxydase de raifort (HRP) pour le marquage in situ à haute densité de protéines cibles ou d'acides nucléiques. Cette technique utilise la réaction peroxydase de tyramide tyramide pour produire de grandes quantités de produits enzymatiques au site de liaison antigène - anticorps. Ces produits se lient aux résidus protéiques environnants, qui à leur tour se lient aux groupes fluorescents, de sorte que le signal de détection est amplifié au niveau géométrique. Cette technologie est compatible avec les colorants haute performance tels que Alexa fluor, les colorants fluorescents traditionnels, etc., permettant un marquage Fluorescent multiple.

Les techniques d'Immunohistochimie multifluorescente sont largement utilisées dans plusieurs domaines:

　　Analyse unicellulaire: capable de détecter simultanément l'expression de plusieurs protéines au niveau d'une seule cellule.

　　Analyse des puces: détection de protéines multiples à haut débit sur Biopuce.

　　Analyse morphologique et fonctionnelle des tissus: Étudier la distribution spatiale et les interrelations des différentes protéines dans les tissus.

　　Analyse du microenvironnement tumoral: analyse panoramique des infiltrations immunitaires tumorales, des points de contrôle immunitaire, des relations spatiales des cellules tumorales avec les cellules immunitaires, etc.

　　Analyse des maladies auto - immunes: Enquête sur la pathogenèse et la progression des maladies auto - immunes.

　　Évaluation de la réaction d'exclusion: réponse immunospécifique après surveillance et évaluation.

Les étapes approximatives de la détection immunohistochimique par fluorescence multiple sont les suivantes:

　　Échantillonnage: obtention d'un échantillon de tissu à détecter, généralement par la méthode de la tranche.

　　Traitement fixe: fixation d'échantillons de tissus avec des substances telles que le formaldéhyde ou l'éthanol pour préserver leur structure morphologique.

　　Traitement des tranches: le tissu fixé est coupé en tranches minces, généralement de 4 à 5 microns d'épaisseur.

　　Marquage des anticorps: Sélectionnez des anticorps spécifiques pour marquer la protéine cible, qui se lient généralement à des substances telles que la fluorescéine ou des enzymes.

　　TSA amplifié: amplification du signal par la technique TSA permettant le dépôt massif de fluorescéine sur le site de liaison antigène - anticorps.

　　Traitement de teinture: les anticorps marqués sont liés à des cellules tissulaires spécifiques par une méthode de coloration par fluorescence.

　　Acquisition et analyse d'images: les images sont acquises à l'aide d'un microscope à fluorescence ou d'un Microscope confocal et analysées quantitativement et qualitativement.

Les méthodes d'analyse d'images pour l'Immunohistochimie multifluorescente comprennent:

　　Analyse qualitative: juger de l'expression et de la localisation de la protéine cible dans les tissus en observant la distribution et l'intensité du signal de fluorescence.

　　Analyse quantitative: quantification du signal de fluorescence à l'aide d'un logiciel de traitement d'images comparant les différences d'expression des protéines dans différents échantillons ou dans différentes conditions.

　　Analyse de co - localisation: analyser les relations spatiales entre les différents signaux de fluorescence et étudier les interactions et la co - localisation entre les protéines.

Par ces méthodes analytiques,Détection immunohistochimique multifluorescenteLa technologie est capable de fournir une richesse d'informations biologiques qui aident à comprendre en profondeur les processus physiologiques et pathologiques des cellules.