Kit de détection de la teneur en Acide phytique micromethod

Kit de détection de la teneur en Acide phytique instructions

Méthode des traces

Numéro de fret:BC5845

Spécifications:100T/48S

Composition du produit: Veuillez vérifier soigneusement si le volume de réactif correspond au volume contenu dans la bouteille avant utilisation, en cas de doute, veuillez contacter le personnel de solebao à temps.

Formulation de la solution:

1, réactif II: ajouter 4ml de réactif I avant utilisation provisoire, bien dissoudre; Conserver avec des réactifs incomplets - 20 ℃ fractionnement4Semaines, évitez le gel et la dégel répétés;

2, réactif III: avant utilisation provisoire ajouter 2,36 ml d'eau distillée pour dissoudre complètement, puis mettre la tête du pistolet sous le niveau liquide ajouter lentement0,64 mlAcide sulfurique concentré, bien mélangé; 2 - 8℃ peut être sauvé4Semaines;

3, réactif IV: avant utilisation provisoire ajouter 15 ml d'eau distillée pour dissoudre complètement, puis mettre la tête du pistolet sous le niveau liquide ajouter lentement15 μLAcide sulfurique concentré, bien mélangé; 2 - 8℃ peut être sauvé4Semaines;

4, liquide de travail: avant utilisation provisoire selon la taille de l'échantillon selon le réactif trois: réactif quatre = 1ml: 5 ml (total)6 ml,40T)Mélange proportionnel, utilisé le jour même après la configuration;

5, Standard: Avant l'utilisation provisoire ajouter 1,08 ml de réactif une fois suffisamment dissous, formulé en 10 μmol / ml d'Acide phytique standard, 2 - 8 ℃ pour conserver pendant 4 semaines;

6, formulation de 250 nmol / ML Standard: 50 μl de 10 μmol / ML standard d'Acide phytique et 450 μl d'eau distillée sont mélangés à 1 μmol / ML standard (c. - à - D. 1000 nmol / ML) avant utilisation préliminaire; Prenez 250 µl supplémentaires de 1000 nmol / ML standard et750 μl d'eau distillée mélangée est formulée dans un standard d'Acide phytique de 250 nmol / ML pour la mesure de tube standard de la table d'opération ci - dessous, maintenant utilisé.

Description du produit:

L'Acide phytique, également connu sous le nom d'Inositol Hexaphosphate, Cyclohexanol hexaphosphate, est omniprésent dans les cellules eucaryotes et joue un rôle clé dans de nombreuses activités cellulaires telles que: le maintien de l'homéostasie inorganique du phosphore, la participation à la transduction du signal des hormones végétales, la participation en tant que Cofacteur des enzymes.ADNRéparation,ARNEdit etARNmSortie. L'Acide phytique fournit la principale source de phosphore pendant la germination et la croissance des plantes et est largement présent dans les aliments végétaux tels que les céréales, les légumineuses, les fruits, les légumes et les fruits secs.

Dans certaines conditions environnementales, la Phytase peut décomposer le Phytate de sodium (Inositol Hexaphosphate dodécasodique) pour produire du phosphore inorganique et des dérivés d'Inositol, dans des conditions acides, le phosphore inorganique et le Molybdate d'ammonium chromogène réagissent pour produire une substance bleue de bleu de molybdène, qui a un pic d'absorption caractéristique à 700 nm, en déterminant la teneur en phosphore inorganique, la teneur en Acide phytique peut être calculée.

Remarque: Avant l'expérience, il est recommandé de sélectionner 2 à 3 échantillons avec de grandes différences attendues pour la pré - expérience.

Instruments et fournitures à apporter:

Spectrophotomètre visible / étalon enzymatique, centrifugeuse cryogénique, bain - Marie/Incubateur thermostatique, balance d'analyse, boîte colorimétrique en microverre/ 96Plaque d'orifice, pistolet à pipette réglable, mortier/Homogénateur,Acide sulfurique concentré（> 98%,AR) et, glace et eau distillée.

Étapes opérationnelles:

Un,Traitement des échantillons(la taille de l'échantillon à mesurer peut être ajustée de manière appropriée, les proportions spécifiques peuvent être consultées)

1. Échantillons de plantes fraîches: selon la masse (g): extrait un volume(mL)pour1Pour:5 à 10Proportion (recommandé de prendre environ0.1g, adhérer1 mlExtrait i) Ajouter l'extrait I, après homogénéisation adéquate, commotion à température normale2h, puis à4℃,10000gCentrifugation10 minutes， 取0,8 mlSurnageant, ajouter à nouveau lentement0,15 mlExtrait liquide deux, mélange de soufflage lent à aucune production de bulles,4 ℃ 10000 gCentrifugation10 minutesAprès le retrait à mesurer.

2. Échantillons de plantes séchées en poudre: selon la masse (g): un volume de liquide d'extraction(mL)pour1Pour:5 à 20Proportion (recommandé de prendre environ0.05g, adhérer1 mlExtrait i) Ajouter l'extrait I, après homogénéisation adéquate, commotion à température normale2h, puis à4℃,10000gCentrifugation10 minutes， 取0,8 mlSurnageant, ajouter à nouveau lentement0,15 mlExtrait liquide deux, mélange de soufflage lent à aucune production de bulles,4 ℃ 10000 gCentrifugation10 minutesAprès le retrait à mesurer.

3. échantillon liquide: Prenez 100μl de liquide pour ajouter1 mlExtrait un, commotion à température normale2h, puis à4℃,10000gCentrifugation10 minutes， 取0,8 mlSurnageant, ajouter à nouveau lentement0,15 mlExtrait liquide deux, mélange de soufflage lent à aucune production de bulles,4 ℃ 10000 gCentrifugation10 minutesAprès le retrait à mesurer.

Note:Extrait deuxDoit être ajouté lentement, après l'ajout produira beaucoup de bulles, recommandé2Ml de tube EP pour l'opération.

II. Étapes de détermination

1. Préchauffage du spectrophotomètre visible / étalon enzymatique30 minutesCi - dessus, réglez la longueur d'onde à700 nm, l'eau distillée du spectrophotomètre visible est mise à zéro.

2. Feuille de fonctionnement: (les réactifs suivants sont ajoutés dans le tube de 1,5 mlep)

Iii. Calcul de la teneur en Acide phytique

1. Calculé par la concentration de protéine d'échantillon

Teneur en Acide phytique (nmol/mg prot)=ΔA détermination× CL'objectif÷ΔNorme a× VL'échantillon÷(V)L'échantillon× Cpr) = 250×ΔA détermination÷ΔNorme a÷Cpr

2. Calculé par la qualité de l'échantillon

Teneur en Acide phytique (nMol / G masse)=ΔA détermination× CL'objectif÷ΔNorme a× VEffacer+ VExtrait deux÷ (W × V)Effacer÷VExtrait un) et

= 296.875 ×ΔA détermination÷ΔNorme a÷W

3. Calculé par volume de liquide

Teneur en Acide phytique (nmol/mL)=ΔA détermination× CL'objectif÷ΔNorme a× VEffacer+ VExtrait deux÷ [V]liquide× VEffacer÷(V)Extrait un+ Vliquide)]

= 3265.625 ×ΔA détermination÷ΔNorme a

Norme C: concentration de tube standard, 250nmol/mL； V - Sample: ajouter le volume de l'échantillon,0,12 ml; v surnageant: volume de surnageant au moment de l'extraction,0,8 ml;VExtrait II: volume auquel est ajouté l'extrait II,0,15 ml;VExtrait I: volume d'extrait ajouté,1 ml; CPR: concentration protéique de l'échantillon,mg/mL; v liquide: volume de l'échantillon liquide,0,1 ml; w: qualité de l'échantillon,g- Oui.

Précautions:

1, si∆A détermination inférieure à0.010Ou la valeur d'absorption de lumière du tube de détermination est proche du tube blanc, peut augmenter la taille de l'échantillon avant de procéder à la détermination; Si∆A détermination supérieure à1Il est recommandé de nettoyer l'échantillon avec de l'eau distillée correctement diluée avant de procéder à la détermination. Faites attention à la modification synchrone de la formule de calcul.

2, si l'échantillon est turbide après avoir été ajouté au liquide de travail, il est recommandé de nettoyer l'échantillon avec de l'eau distillée correctement diluée avant de procéder à la détermination. Faites attention à la modification synchrone de la formule de calcul.

3, le liquide d'extraction contient un précipitant de protéines, de sorte que le surnageant ne peut pas être utilisé pour la détermination de la concentration en protéines. Pour déterminer la teneur en protéines, un autre échantillon est nécessaire.

Exemples expérimentaux:

1. Peser 01044g d'échantillon d'oignon, suivez l'étape d'extraction et l'étape de détermination, utilisez96Calcul de la mesure de la plaque de trou:ΔA détermination= unDétermination- AContrôle= 0411 - 0375 = 0036,ΔNorme a= unnorme- Avide= 0811 - 0096 = 0715, calculé par la qualité de l'échantillon:

Teneur en Acide phytique (nMol / G masse)= 296.875 ×ΔA détermination÷ΔNorme a÷W=143,18nMol / g de masse.

2. Peser 0,05 g de farine de blé, suivez l'étape d'extraction et l'étape de détermination, utilisez96Calcul de la mesure de la plaque de trou:ΔA détermination= unDétermination- AContrôle= 0331 - 0188 = 0143,ΔNorme a= unnorme- Avide= 0811 - 0096 = 0715, calculé par la qualité de l'échantillon:

Teneur en Acide phytique (nMol / G masse)= 296.875 ×ΔA détermination÷ΔNorme a÷W=1187,5nMol / g de masse.

Références:

[1] Senna R, Simonin V, Silva-Neto M A C, et al. Induction de l'activité de la phosphatase acide lors de la germination des graines de maïs (Zea mays). [J]. Physiologie et biochimie des plantes, 2006, 44(7-9):467-473.

[2] Iqbal T H, Lewis K O, Cooper B T. Activité de la phytase dans l'intestin grêle humain et chez le rat [J]. Gut, 1994, 35(9):1233-1236.

[3] Azeke M A, Egielewa S J, Ihimire E. Effet de la germination sur l'activité phytase, les teneurs en phytate et en phosphore total du riz (Oryza sativa), du maïs (Zea mays), du millet (Panicum miliaceum), du sorghe (Sorghum bicolor) et du blé (Triticum aestivum) [J]. Journal de la science et de la technologie alimentaires, 2011.

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