RT SuperMix tout-en-un pour qPCR 试剂

Conditions de stockage et de transport

-20℃

Composition du produit

RT SuperMix tout-en-un pour qPCR 试剂

Présentation du produit

RT supermix for QPCR (with dsdnase) est un kit de synthèse d'adnc à un brin de haute qualité, efficace, pratique et peu polluant, contenant tous les composants nécessaires à la synthèse d'adnc à un brin tels que M - Mlv giiireverse transcriptase et sa réaction Buffer, inhibiteurs d'enzymes ARN, dntps, oligo (dt) 20vn et amorces aléatoires, il suffit d'ajouter un gabarit d'ARN et de l'eau pour commencer la réaction. All - in - one RT supermix pour QPCR (withdsdnase) en tant que kit de synthèse d'adnc à brin unique amélioré, jusqu'à 12 KB d'adnc peuvent être obtenus en 15 minutes, et les produits peuvent être utilisés dans des expériences telles que la QPCR, la PCR ordinaire, etc. L'ARN extrait de tissus ou de cellules a tendance à être contaminé par de l'ADN génomique résiduel, et si aucun traitement d'élimination n'est effectué avant la transcription inverse, l'ADN génomique et l'adnc sont amplifiés simultanément lorsque la réaction QPCR est effectuée en aval, en particulier lorsque les amorces sont conçues sur le même exon, ce qui affecte la précision quantitative. La dsdnase mise en oeuvre dans ce kit est capable de digérer spécifiquement l'ADN en double brin ou en double brin hétérozygote de dnarn et est thermosensible, ce qui permet une inactivation rapide et irréversible à la température de la réaction de transcription inverse. Contrairement aux méthodes traditionnelles qui permettent à la DNase I d'éliminer la contamination de l'ADN génomique, la dsdnase n'a pas besoin d'ajouter de l'EDTA supplémentaire pour l'inactivation, ce qui permet non seulement de gagner du temps expérimental, mais réduit également l'inhibition de la réponse de transcription inverse. Selon la gravité de la contamination de l'ADN génomique, il est possible de choisir un mode opératoire dans lequel la contamination de l'ADN génomique est effectuée séparément de la transcription inverse ou dans lequel la contamination de l'ADN génomique est effectuée en une seule étape.

mode d'emploi

Contre les échantillons d'ARN à faible teneur en ADN génomique (Protocole recommandé)

RT SuperMix tout-en-un pour qPCR 试剂

① formulé sur la glace comme suit système réactionnel:

A. l'utilisation d'ARN de haute qualité extrait du kit comme modèle est recommandée.

② aspiration douce et mélange, distance instantanée;

③ 37 ℃ incuber pendant 2 min pour éliminer la contamination de l'ADN génomique;

④ 55 ℃ incuber pendant 15 min;

⑤ après la fin de la réaction, incuber à 85°c pendant 2 min pour mettre fin à la réaction;

⑥ placer rapidement l'adnc obtenu sur de la glace pour des expériences ultérieures; Ou conserver immédiatement à - 20°C.

Contre les échantillons d'ARN à haute teneur en ADN génomique

1. Élimination de la contamination de l'ADN génomique

① formulé sur la glace comme suit système réactionnel:

A. l'ARN extrait du kit est recommandé comme modèle.

② aspiration douce et mélange, distance instantanée;

③ 37 ℃ incuber pendant 2 min pour éliminer la contamination de l'ADN génomique;

Remarque: si la contamination de l'ADN génomique dans l'ARN est grave, l'incubation à 37 ° C peut être prolongée de manière appropriée jusqu'à 5 min.

④ 65 ℃ incuber pendant 2 min pour désactiver la dsdnase, puis mettre sur la glace.

2. Synthèse du premier brin d'adnc

① formulé sur la glace comme suit système réactionnel:

② aspiration douce et mélange, distance instantanée;

③ 50 ℃ incuber pendant 15 min;

Remarque: si l'ARN cible ne contient pas de structure Poly (A), il peut être préalablement incubé à 25 ° C pendant 10 min.

④ après la fin de la réaction, incuber à 85°c pendant 2 min pour mettre fin à la réaction;

⑤ la solution d'adnc obtenue est placée sur de la glace pour des expériences ultérieures.

Remarque: la solution d'adnc est stockée à - 20 ° C, pas plus d'une semaine est recommandée; Placé à - 80 ℃ peut être stocké à long terme.

Précautions

Le prémélange contient déjà de l'Oligo (dt) 20vn et des amorces aléatoires, non seulement pour les ARNm eucaryotes contenant une structure Poly (A), mais aussi pour les matrices telles que les ARNm procaryotes, les arnr eucaryotes et les ARNt sans structure Poly (A), mais pas pour les matrices d'ARN plus petites telles que les miarn.

Fondée en 2004, la société américaine azaood développe et produit des enzymes purifiées de haute qualité, des protéines, des acides nucléiques et des kits de séparation cellulaire, du sérum de veau foetal pour la recherche en sciences de la vie, le diagnostic et les applications biotechnologiques; Azood est un important fabricant certifié ISO9001 et peut répondre aux exigences des entreprises allant de la recherche au bioprocédé à grande échelle et aux applications OEM.