Zeta Life détection de la prolifération cellulaire et de la toxicité - CCK Kit

Zeta Life détection de la prolifération cellulaire et de la toxicité - CCK Kit

Prix: ￥615 à 2800

Marque:ZETA LIFE.

Numéro de fret:K009

Origine:États-Unis

fournisseurPour:ShanghaiLeic le mêmeBiotechnologie limitée

quantité: 1000

Nom anglais: cck8

Durée de conservation:24 mois

Conditions de conservation: 4°C conservation à l'abri de la lumière

spécification:500T-3000T

Zeta Life détection de la prolifération cellulaire et de la toxicité - CCK Kit

Le kit cellcounting, abrégé en kit CCK, est un kit de détection rapide et hautement flexible largement utilisé pour la prolifération cellulaire et la Cytotoxicité à base de wst (sel de tétrazole soluble dans l'eau, nom chimique: sel monosodique de 2 - (2 - méthoxy - 4 - nitrophényl) - 3 - (4 - nitrophényl) - 5 - (2,4 - disulfophényl) - 2H - tétrazole).

CCK est une alternative améliorée à MTT, avec des avantages évidents par rapport à MTT ou à d'autres produits similaires tels que xtt.mts, etc.:

Le formazan réduit par la déshydrogénase intramitochondriale de la CCK est soluble dans l'eau et ne nécessite pas de solution spécifique pour se dissoudre, alors que ni le wst ni le xtt, ni le MTS ne sont solubles dans l'eau, de sorte que les étapes ultérieures de dissolution peuvent être omises.

- CCK est plus stable que xtt et MTS, ce qui rend les résultats expérimentaux plus stables.

- CCK et MTT, xtt, etc. ont une plage linéaire plus large et une sensibilité plus élevée.

Comparaison entre la méthode CCK et d'autres méthodes de détection:

Instructions de fonctionnement:

I. faire une courbe standard (lors de la détermination du nombre spécifique de cellules)

1, compter d'abord le nombre de cellules dans la suspension cellulaire préparée avec une plaque de comptage cellulaire, puis ensemencer les cellules.

2, selon la proportion (par exemple: 1 / 2 Proportion) dilué avec le milieu de culture dans un rapport égal à - un gradient de concentration cellulaire, généralement faire 3 - 5 gradients de concentration cellulaire, chaque groupe de 3 - 6 pores.

3, après l'inoculation de la culture pendant 2 - 4 heures pour permettre aux cellules de coller, puis ajouter la culture de réactif CCK - après un certain temps pour déterminer la valeur OD, faire une bande avec le nombre de cellules en abscisse (axe X),

La valeur od est une courbe standard en ordonnée (axe y). Sur la base de cette courbe standard, il est possible de déterminer le nombre de cellules d'un échantillon inconnu (l'essai de cette courbe standard suppose que les conditions de l'expérience soient d'un

De manière à faciliter la détermination du nombre d'inoculations des cellules ainsi que le temps de culture après addition de CCK).

II. Détection de l'activité cellulaire

1, ensemencer la suspension cellulaire (100 µl puits) dans des plaques de 96 puits. Les plaques de culture sont préculturées dans un incubateur (à 379c, 5% CO 2).

Ajouter 110 µl de solution de CCK à chaque puits (attention à ne pas créer de bulles dans les puits, elles affecteront la lecture de la valeur OD).

3, incuber la plaque de culture dans l'incubateur pendant 14 heures.

4, détermination de l'Absorbance à 450 nm avec un étalon enzymatique.

Si la valeur de do n'est pas déterminée temporairement, en vue d'une détermination ultérieure, 10 µl d'une solution de HCl 0,1 m ou d'une solution de SVD à 1% peuvent être ajoutés à chaque puits et la culture est masquée.

Les plaques sont conservées à l'abri de la lumière à température ambiante. L'Absorbance ne change pas pendant 24 heures.

Iii. Valeur ajoutée cellulaire ~ détection de toxicité

1, configurer 100u de suspension cellulaire dans une plaque 96 puits. Les plaques de culture sont préculturées dans un incubateur pendant 24 heures (à 379°c, 5% CO 2).

2, ajouter 10 µl de la substance à mesurer à différentes concentrations à la plaque de culture.

Incuber les plaques dans l'incubateur pendant une période appropriée (par exemple: 6, 12, 24 ou 48 heures).

4, voulez ajouter 10µl de solution CCK par puits (attention à ne pas créer de bulles dans les puits, ils affecteront la lecture de la valeur OD).

5, incuber la plaque de culture dans l'incubateur pendant 1 - 4 heures.

6, détermination de l'Absorbance à 450 nm avec un étalon enzymatique.

Si la valeur de do n'est pas déterminée temporairement, en vue d'une détermination ultérieure, 10 µl d'une solution de HCl 0,1 m ou d'une solution de SVD à 1% peuvent être ajoutés à chaque puits et la plaque de culture couverte est conservée à l'abri de la lumière à température ambiante. L'Absorbance ne change pas pendant 24 heures.

Remarque: si la substance à tester est oxydante ou réductrice, le milieu frais peut être remplacé avant l'ajout de CCK (le milieu de culture est éliminé et les cellules sont lavées deux fois avec le milieu de culture, puis un nouveau milieu est ajouté), éliminant l'effet du médicament. Bien sûr, l'impact du médicament est relativement faible, il est possible de ne pas changer le milieu de culture, directement déduit de l'absorption du vide après l'ajout du médicament dans le milieu de culture.

Prêt pour:

①Il est recommandé de faire d'abord plusieurs puits pour tâtonner le nombre de cellules inoculées et le temps de culture après l'ajout du réactif CCK.

②Une pipette multicanaux est recommandée dans des cas conditionnels, ce qui peut réduire les différences dans la soustraction des trous parallèles. Adhérer

Lorsque le réactif CCK, il est recommandé de coller en diagonale la paroi de la plaque de culture plus, ne pas insérer sous la page de milieu de culture plus, facile à créer des bulles d'air, interférera avec la lecture de la valeur od.

③Les globules blancs peuvent nécessiter une culture plus longue.

④Lorsque l'on utilise une plaque standard de 96 puits, le petit ensemencement des cellules plaquées est d'au moins 1 000 L / puits (100 µ de milieu). La sensibilité lors de la détection des globules blancs est relativement faible, donc

La quantité d'inoculation recommandée n'est pas inférieure à 2500 puits / F (100 µl de milieu). Si vous souhaitez utiliser des expériences de plaques 24 ou 6 puits, calculez d'abord la quantité d'inoculum correspondante par puits et ajoutez la solution de CCK à 10% du volume total du milieu par puits.

⑤S'il n'y a pas de filtre à 450 nm, vous pouvez utiliser un filtre avec une Absorbance comprise entre 430 et 490 nm, mais la sensibilité de détection du filtre à 450 nm est plus élevée.- Oui.

⑥L'Absorbance du rouge de phénol dans le milieu de culture peut, au moment du calcul, être éliminée en déduisant l'Absorbance du fond dans les puits vides et n'a donc pas d'effet sur la détection.

Calcul dynamique:

Viabilité cellulaire * (%) = [A (dosage) - A (blanc)] / [A (dosage) - A (blanc)] X100

A (dosage): Absorbance des pores avec cellules, solution de CCK et solution pharmaceutique

A (blanc): Absorbance des pores avec milieu de culture et solution de CCK sans cellules

A (0 dosage): Absorbance des pores avec cellules, solution de CCK sans solution pharmaceutique

* viabilité cellulaire: viabilité cellulaire proliférative ou viabilité cytotoxique

Conditions de conservation:

49c conservation à l'abri de la lumière, valable un an.

Conseils thermoacoustiques: non disponible en traitement clinique.