Guide complet du processus de caractérisation des anticorps services techniques de détection

Guide complet du processus de caractérisation des anticorps services techniques de détectionPrésentation détaillée

Les performances supérieures et inférieures des anticorps en tant que molécules clés dans la recherche fondamentale et la biomédecine affectent directement la fiabilité des résultats expérimentaux et l'efficacité des applications en aval. La caractérisation systématique des anticorps contribue à la définition de leurs caractéristiques structurelles, de leur activité fonctionnelle et de leur stabilité et constitue une étape essentielle pour assurer la cohérence de la qualité et la contrôlabilité fonctionnelle des anticorps, en particulier dans les domaines du développement de médicaments, des réactifs de diagnostic et du traitement jīngzhān.

Pourquoi la caractérisation des anticorps est - elle importante?

Les anticorps sont une classe de molécules immunitaires hautement fonctionnelles et spécifiques, mais dans les applications pratiques, les performances des anticorps varient souvent considérablement en raison de leurs différences structurelles ou de la façon dont ils sont préparés. Les principales tâches de caractérisation des anticorps sont les suivantes:

• Confirmer la séquence d'anticorps et la structure moléculaire.

• Clarifier sa capacité de liaison et sa spécificité.

• Évaluer sa stabilité, sa pureté et son activité biologique.

Il s'agit non seulement d'une garantie fondamentale de la reproductibilité et de la crédibilité des résultats de la recherche scientifique fondamentale, mais également d'un niveau de qualité important avant de passer au stade clinique dans le développement de médicaments anticorps, le diagnostic concomitant cdx et d'autres domaines.

II. Processus de base et voies technologiques pour la caractérisation des anticorps

La caractérisation des anticorps comprend généralement les étapes de base suivantes, chacune avec les moyens techniques et les indicateurs analytiques correspondants.

Confirmation de séquence (Sequence confirmation)

(1) Objectif: confirmer l'information sur la séquence des régions variables (VH, vl) et constantes (ch) de l'anticorps, assurer la cohérence et la contrôlabilité de l'anticorps.

(2) Techniques couramment utilisées:

• Séquençage par spectrométrie de masse (LC - MS / MS): convient aux anticorps qui ont été produits mais pour lesquels il n'existe pas d'information sur la séquence originale permettant d'inverser la séquence à partir du niveau protéique.

• Séquençage de l'adnc: adapté aux cellules d'hybridomes ou aux vecteurs d'expression, la séquence du gène de l'anticorps est obtenue directement au niveau de l'acide nucléique.

Pureté et intégrité des anticorps (Purity & Integrity)

(1) Objectif: s'assurer que les anticorps n'ont pas subi d'agrégation, de dégradation ou de modification garantissant leur stabilité structurale conformément aux expériences en aval.

(2) Techniques couramment utilisées:

• SDS - page / Western Blot: détermine grossièrement le poids moléculaire de l'anticorps et le rapport chaîne lourde / chaîne légère.

• Sec - HPLC (gel filtration): séparation des monomères par rapport aux agrégats, évaluation du niveau d'agrégation.

• Ce - SDS: méthode d'électrophorèse à haute résolution, analyse automatisée de l'intégrité des chaînes lourdes et légères.

• Analyse par spectrométrie de masse: pour détecter une légère dégradation ou modification des anticorps, particulièrement adaptée aux scénarios de contrôle de la qualité.

Glycosylation et analyse ptm

(1) Objectif: le mode de glycosylation de l'anticorps affecte de manière significative sa stabilité structurelle par rapport à la fonction immunitaire médiée par FC. D'autres modifications post - traductionnelles (p. ex., oxydation, désamidification) doivent également être surveillées.

(2) Techniques couramment utilisées:

• Glycation par spectrométrie de masse (glycan profiling): identification rapide du type de chaîne sucrée et de l'abondance relative.

• Analyse de la protéine / peptidogramme LC - MS: identification des positions et des types de modifications post - traductionnelles.

• Focalisation isoélectrique capillaire (CIEF): évaluation des variations isoélectriques du point, reflétant indirectement l'état de la modification.

Activité et affinité de Binding (Binding Specificity & Affinity)

(1) Objectif: vérifier si l'anticorps reconnaît spécifiquement la cible et quantifier davantage ses paramètres d'affinité (tels que la valeur KD).

(2) Techniques couramment utilisées:

• ELISA: détermine rapidement si elle se lie à un antigène cible.

• Western Blot / IHC: vérification de la capacité de reconnaissance spécifique des anticorps dans différents échantillons.

• Résonance Plasmonique de surface (SPR) / interférence de la couche biologique (Bli): détermination des paramètres cinétiques des interactions antigène - anticorps (Ka, KD, KD, etc.) à haut débit et avec une grande sensibilité.

Stabilité et thermodynamique des anticorps

(1) Objectif: la stabilité physique des anticorps dans le stockage, le transport et l'application a un impact important sur leurs propriétés.

(2) Techniques couramment utilisées:

• DSC (Differential Scanning Calorimetry): détermination de la température de dénaturation thermique (TM) d'un anticorps, reflétant sa stabilité thermique.

• DLS (Dynamic Light Scattering): détecte la tendance des anticorps à s’agréger en solution.

• Expérience de stabilité accélérée: évaluation de la stabilité des anticorps dans différentes conditions de pH, de température, de gel - dégel répété, etc.

Iii. Différences dans les stratégies de caractérisation contre des types d'anticorps spécifiques

Anticorps d'origines ou d'utilisations différentes, dont les stratégies de caractérisation diffèrent également:

Iv. Défis communs dans la caractérisation des anticorps et recommandations d'optimisation

1, agrégation d'anticorps difficile à séparer

Il est recommandé de combiner les méthodes sec - HPLC et DLS pour la confirmation multidimensionnelle des proportions de monomères.

2, retouche post - traduction difficile à reconnaître

L'analyse LC - MS / MS au niveau dànbáizhì omique peut être utilisée pour améliorer le taux de détection des modifications.

3, anticorps commerciaux de séquence inconnue difficile à contrôler

Le séquençage par spectrométrie de masse de novo combiné à l'expression recombinante est recommandé pour la vérification en boucle fermée de la qualité.

V. petapock Biotech: plateforme de services de caractérisation d'anticorps à guichet unique

À chaque nœud clé de la caractérisation des anticorps, petapock Biotech vous propose des solutions personnalisées:

• Plateformes de spectrométrie de masse orbitrap et Q - TOF haute résolution.

• Analyse de séquence complète d'anticorps avec Panorama de modification PTM.

• Service d'évaluation de la dynamique d'affinité SPR / BLI.

• L'analyse des anticorps est conforme aux normes CGMP.

Que vous fassiez de la recherche fondamentale, que vous développiez des produits de diagnostic ou que vous fassiez la promotion d'une déclaration ind de médicaments anticorps, nous pouvons créer un système de données scientifique et fiable pour la caractérisation des anticorps.

La caractérisation des anticorps ne doit pas être un simple lien de « validation», mais plutôt une étape préalable importante pour stimuler l'innovation et l'assurance de la qualité. Grâce à un processus de caractérisation des anticorps systématique, complet et axé sur les données, les chercheurs et les entreprises biomédicales peuvent faire progresser la recherche et le développement en aval et la transformation clinique avec plus de tranquillité d'esprit. Batec Biotech s'efforce toujours d'être votre partenaire de confiance en matière d'analyse d'anticorps, contribuant à la recherche scientifique de haute qualité et au développement médical.

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Projets en vedette de Biotech de baitepike

I. séquençage des protéines

Utilisant le nouveau spectromètre de masse obitrap fusion Lumos de thermo Corporation et le système de séquençage de dégradation Edman de Shimadzu Corporation pour l'analyse des séquences de dànbáizhì, battlepike Biotechnology offre des services d'analyse de séquençage de protéines basés sur la spectrométrie de masse, y compris l'analyse de la composition en acides aminés de dànbáizhì, nduāncèxù, cduāncèxù et l'analyse de séquences complètes, ainsi que des services d'analyse de séquences n - terminales de dànbáizhì basés sur la dégradation d'Edman. Pour dànbáizhì de séquences théoriques inconnues, un service de séquençage de Novo dànbáizhì basé sur la méthode de séquençage de novo est fourni pour effectuer l'analyse de la séquence protéique.

※ avantage de service:

1. Avec obitrap fusion Lumos, un instrument de spectrométrie de masse avancé dans le monde;

2. Une couverture de 100% de la séquence protéique cible déterminée peut être obtenue;

3. Peut déterminer jusqu'à 70 séquences d'acides aminés à l'extrémité n de la protéine;

4. Plusieurs formes d'échantillons peuvent être déterminées: solution de protéine, bande de protéine de PVDF;

5. Faible quantité d'échantillon: l'échantillon de protéine a besoin de seulement 5 - 10ug pour compléter l'essai;

Le séquençage n'est pas affecté par les modifications n - terminales telles que la fermeture n - terminale, la Pec et la glycosylation.

II. Dànbáizhì omique

Utilisant la plate - forme de spectrométrie de masse orbitrap fusion Lumos de thermo Fisher en combinaison avec Nano - LC, petitpeck Biotechnology fournit de nombreux services d'analyse dànbáizhìomique tels que la dànbáizhìomique quantitative, la dànbáizhìomique ciblée, la polypeptidomique, la protéomique modifiée post - traductionnelle et bien plus encore. En outre, petitpack Biotech a lancé un nouveau service de 4ddànbáizhì basé sur timstof pro, qui facilite les travaux de recherche tels que la protéomique à micro - échantillons, la médecine à grands échantillons et la modification à haut débit.

※ avantage de service:

1. Analyse quantitative des protéines à haut débit: analyse expérimentale à grande échelle par groupe multicontrôle, découverte de nouveaux biomarqueurs;

2. In Vivo In vitro de nombreuses méthodes de marquage dànbáizhì, adaptées à l'analyse de nombreux échantillons de tissus, de cellules, de sang, etc.;

3. Haute sensibilité d'analyse de spectrométrie de masse, haute répétition des résultats expérimentaux;

4. Protéines de faible abondance détectables, large gamme linéaire;

5. Zhuānyè analyse Bioinformatique, l'analyse est plus systématique et précise.

Iii. Analyse technique en flux par spectrométrie de masse unicellulaire

La biotechnologie de battlepike utilise le système de flux de spectrométrie de masse de fluidigm pour l'analyse de la technologie de flux de spectrométrie de masse unicellulaire, utilisant des marqueurs d'éléments métalliques (généralement des anticorps spécifiques marqués par des éléments métalliques) pour marquer les molécules à la surface et à l'intérieur des cellules, puis isolant les cellules individuelles avec le principe de cellules de flux, puis analysant le spectre de masse atomique des cellules individuelles par spectrométrie de masse à plasma inductif (ICP - MS), zuì après avoir converti les données du spectre de masse atomique en poids d'expression moléculaire signal à la surface et à l'intérieur des cellules.

※ avantage de service:

1. Technologie avancée pour combler les lacunes technologiques

L'utilisation de la technologie d'anticorps de marquage métallique évite le problème des canaux fluorescents en flux traditionnels qui sont peu nombreux et susceptibles d'interagir les uns avec les autres. Avec la caractérisation simultanée de plusieurs indicateurs au niveau unicellulaire, la biotechnologie de petapock peut détecter simultanément 51 protéines cibles.

2. Grand nombre d'analyses, coût inférieur

Rnaseq unicellulaire est limitée par le coût et d'autres facteurs, le nombre d'analyses de toutes les cellules de l'échantillon est généralement d'environ 2 x 10 ^ 4, tandis que la spectrométrie de masse en flux une fois (échantillon unique) peut analyser au moins 10 ^ 5 cellules, ce qui permet d'obtenir des améliorations de L'ordre de grandeur, et le coût n'est pas plus élevé que le rnaseq unicellulaire.

3. Grandes perspectives d'application

① les résultats de la spectrométrie de masse en flux peuvent donner des changements dans les sous - populations cellulaires, avec de grandes perspectives de recherche dans le diagnostic clinique, l'étude des mécanismes de la maladie, etc.;

② combiner la technologie d'étiquette métallique avec d'autres technologies aura une nouvelle direction d'application. En plus des protéines conventionnelles, la technologie cellulaire en flux par spectrométrie de masse peut également être utilisée pour la modification post - traductionnelle des protéines;

③ peut détecter la survie cellulaire, la taille des cellules, la quantité d'expression des transcripteurs d'ARNm, le taux de synthèse de l'ADN, ainsi que l'activité de la protéase, etc.

Analyse immunopolypeptidomique basée sur la spectrométrie de masse de haute précision et découverte de nouveaux antigènes

La solution unique d'analyse immunopolypeptidomique et de découverte de nouveaux antigènes basée sur la spectrométrie de masse de haute précision de battlepike Biotechnology comprend notre programme exclusif d'enrichissement et d'identification d'immunopeptides hautement sensibles. Nous sommes en mesure de vous aider à identifier et identifier plus de 10 000 Polypeptides de type I et plus de 10 000 Polypeptides de type II. L'analyse immunopeptidomique via notre plate - forme d'analyse immunopolypeptidomique optimisée à haut débit permet une identification et une quantification reproductibles à partir de matériaux d'échantillon de petite taille. Le service peut être appliqué à la recherche à grande échelle et vise à aider les chercheurs à trouver des solutions au cancer, aux maladies immunitaires et aux maladies infectieuses, en explorant des cibles inconnues.

V. caractérisation des médicaments biologiques

Batepeck est basé sur la technologie de spectrométrie de masse à haute résolution, MALDI TOF， Technologie de séparation chromatographique à haute efficacité, offrant une gamme de protocoles d'analyse biopharmaceutique pour wánshàn, allant de la composition en acides aminés et de l'analyse structurale primaire de produits biologiques tels que dànbáizhì, POLYPEPTIDES, anticorps, vaccins, à l'analyse de la variabilité et de la pureté du produit. Vise à fournir des services d'analyse biopharmaceutique de haute qualité pour aider les fabricants de médicaments biologiques à améliorer la qualité des médicaments biologiques.

Les sept plates - formes d'inspection de la biotechnologie de battlepike

Petitpeck Biotechnology - caractérisation de produits biologiques, Service de qualité multiomique en spectrométrie de masse biologique

Beijing BaiTai Pike Biotech Co., Ltd. S'engage à fournir des services zhuānyè tels que l'inspection de contrôle de qualité et la vérification de projet pour les industries biologiques / pharmaceutiques et des dispositifs médicaux. Le laboratoire de la société suit les règlements et les directives de la nmpa, de l'ich, de la FDA et de l'EMA, etc., avec la double certification du système de qualité CNAS / ISO9001, un système de qualité complet a été établi, les données sont sauvegardées à chaud et à froid / hors site, les équipements sont régulièrement mesurés / vérifiés pendant la période, le suivi de l'audit logiciel, la solution tout - en - un et les services techniques sont fournis aux clients pour soutenir la recherche et le développement de nouveaux médicaments, l'enregistrement des déclarations de médicaments et la libération de la production.

1. La société adopte le système de contrôle de qualité ISO9001, zhuānyè fournit des services d'analyse de détection cro basés sur la spectrométrie de masse;

2. Reconnu par le laboratoire national CNAS pour fournir aux clients des services de recherche de qualité pharmaceutique conformes à la réglementation pharmaceutique mondiale;

3. Le domaine d'activité couvre dànbáizhì omics, polypeptidomics, Metabolomics, caractérisation biopharmaceutique, analyse unicellulaire, flux de spectrométrie de masse unicellulaire, analyse de nuage de Genesis et analyse intégrée de spectrométrie de masse biologique multiomics, etc.;

4. Sept plates - formes d'inspection de contrôle de qualité pour répondre à vos besoins de service à guichet unique;

5. Service 3000 + entreprises, 10000 + choix du client;

6. Dédié à vous fournir un excellent service d'analyse de spectrométrie de masse biologique!

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