Détails techniques de détermination du poids moléculaire LC - MS

Détails techniques de détermination du poids moléculaire LC - MSDetection Technology Service détails Introduction

Dans la recherche en sciences de la vie et le développement biomédical, la détermination précise du poids moléculaire est le lien fondamental de plusieurs maillons tels que l'identification structurelle, le contrôle de la qualité, la recherche et le développement de médicaments. Qu'il s'agisse de confirmer si une protéine est exprimée intacte ou de vérifier la pureté d'une petite molécule synthétisée, l'information sur le poids moléculaire est l'une des données de bùkěhuòquē. Parmi les nombreuses techniques de détermination du poids moléculaire, la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC - MS) est largement utilisée pour la détermination du poids moléculaire du dànbáizhì, des segments peptidiques, des médicaments à petites molécules et même des produits métaboliques en raison de sa haute sensibilité, de sa large applicabilité et de ses capacités de résolution structurelle.

I. Aperçu des principes de la technologie LC - MS

La LC - MS est un système couplé de chromatographie liquide (LC) et de spectrométrie de masse (MS):

• Partie LC: les différents composants de l'échantillon sont d'abord séparés par chromatographie, ce qui réduit l'interférence de la matrice et améliore la spécificité de détection.

• Partie MS: le rapport de charge ionique (M / z) est à nouveau détecté par ionisation, analyseur de masse, ce qui permet d'obtenir des informations sur le poids moléculaire des différents composants.

Les moyens d'ionisation couramment utilisés comprennent:

• Esi (Electrospray ionisation): convient pour l'analyse de composés polaires tels que dànbáizhì, POLYPEPTIDES, nucléotides, etc.

• APCI (Atmospheric Pressure Chemical Ionization): convient aux petites molécules volatiles.

• MALDI (Matrix Assisted Laser désorption Ionization): couramment utilisé pour le balayage rapide du poids moléculaire du dànbáizhì.

Chez battlepike Biotech, nous utilisons principalement la spectrométrie de masse par électrospray à haute résolution (HR - ESI - MS) associée à un système de chromatographie optimisé pour la détermination du poids moléculaire des produits biologiques de petite à grande molécule.

Avantages de LC - MS dans la détermination du poids moléculaire

1, haute sensibilité et haute précision coexistent

Les systèmes LC - MS peuvent détecter des cibles à des concentrations aussi faibles que le picomole (PMOL) ou moins, avec des erreurs de masse généralement contrôlées à < 5 ppm, et sont particulièrement adaptés à la résolution du poids moléculaire des composants traces dans des échantillons complexes.

2, compatibilité qiángdà pour les échantillons complexes

Par rapport aux méthodes traditionnelles telles que SDS - page ou la méthode d'absorption UV, LC - MS n'est pratiquement pas perturbé par les impuretés de l'échantillon et peut être utilisé directement dans les lysats cellulaires, le sérum, le surnageant de fermentation et d'autres systèmes complexes.

3, les informations relatives à la structure peuvent être fournies

En plus de son poids moléculaire, la MS fournit des indices structuraux tels que la distribution isotopique, des informations sur la fragmentation, des modifications post - traductionnelles (p. ex. phosphorylation, glycosylation), qui présentent un avantage naturel dans la confirmation de la structure moléculaire.

Iii. Scénarios d'application typiques pour la détermination du poids moléculaire LC - MS

1, dànbáizhì vérification du poids moléculaire

Au cours de l'expression et de la purification de la protéine recombinante, la confirmation que la protéine cible est complète (par exemple, troncature n - terminale, absence C - terminale, peptide signal non cisaillé) est le lien QC conventionnel. Le poids moléculaire jīngquè mesuré par LC - MS permet de déterminer rapidement si la protéine correspond au poids moléculaire théorique et d'identifier la présence de modifications mineures.

2, pureté de médicament de petite molécule et identification

LC - MS est l'une des méthodes shǒuxuǎn pour la confirmation structurelle après la synthèse de molécules pharmaceutiques. On détermine si le poids moléculaire du pic principal correspond à la structure cible en prenant les pics plasmatiques [M + H] +, [M + na] +, tout en surveillant la présence de sous - produits de synthèse ou de produits de dégradation.

3, contrôle de qualité de synthèse de polypeptide

Les Polypeptides synthétiques artificiellement sont sujets à des échecs d'élongation en bout de chaîne ou à des délétions de résidus. La LC - MS est efficace pour juger de l'intégrité des séquences polypeptidiques, améliorant le succès de la synthèse par rapport à la fiabilité des tests ultérieurs.

4, métabolisme et liposome marquage moléculaire

En Métabolomique, la LC - MS n'est pas seulement utilisée pour la quantification, mais elle assume également la tâche de tamisage primaire du poids moléculaire des métabolites caractéristiques ou des substances différentielles, fournissant une base pour la résolution structurelle ultérieure (par exemple, MS / MS).

Iv. Comparaison avec d'autres techniques de détermination du poids moléculaire

Conclusion: chaque méthode a son propre scénario d'application, et le LC - MS, grâce à sa précision, son applicabilité et ses capacités d'analyse structurale, devient progressivement le principal Protocole de détermination du poids moléculaire dans les analyses biologiques modernes.

V. Avantages du Service de détermination du poids moléculaire LC - MS de petapock Biotech

Chez battlepike Biotech, nous avons construit un système d'analyse LC - MS basé sur des plates - formes gāoduān telles que thermo orbitrap et bruker qtof, ainsi que des processus exclusifs de pré - échantillonnage et d'analyse de données, avec les principaux avantages suivants:

• Capacité de détection à guichet unique de petites molécules à dànbáizhì.

• 3 - 5 jours ouvrables pour la livraison, adapté à plusieurs types d'échantillons.

• Soutenir l'analyse de modification post - traduction, l'identification des isomères et d'autres services étendus.

• Fournir des données brutes + rapport zhuānyè pour faciliter l'archivage et la publication du projet.

Avec l'approfondissement de la recherche biologique et l'accélération de la recherche et du développement de médicaments, la précision et la profondeur de l'information dans la détermination du poids moléculaire sont de plus en plus appréciées. LC - MS, avec ses capacités analytiques qiángdà, aide les scientifiques à passer de « avoir» à « quasi», de « quantité» à « qualité». Si vous effectuez l'identification de dànbáizhì, la validation de petites molécules ou le contrôle de la qualité des Polypeptides, n'hésitez pas à contacter petitpak Biotech, nous vous fournirons un support de données solide pour votre projet de recherche avec la plate - forme technologique LC - MS de zhuānyè.

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Projets en vedette de Biotech de baitepike

I. séquençage des protéines

Utilisant le nouveau spectromètre de masse obitrap fusion Lumos de thermo Corporation et le système de séquençage de dégradation Edman de Shimadzu Corporation pour l'analyse des séquences de dànbáizhì, battlepike Biotechnology offre des services d'analyse de séquençage de protéines basés sur la spectrométrie de masse, y compris l'analyse de la composition en acides aminés de dànbáizhì, nduāncèxù, cduāncèxù et l'analyse de séquences complètes, ainsi que des services d'analyse de séquences n - terminales de dànbáizhì basés sur la dégradation d'Edman. Pour dànbáizhì de séquences théoriques inconnues, un service de séquençage de Novo dànbáizhì basé sur la méthode de séquençage de novo est fourni pour effectuer l'analyse de la séquence protéique.

※ avantage de service:

1. Avec obitrap fusion Lumos, un instrument de spectrométrie de masse avancé dans le monde;

2. Une couverture de 100% de la séquence protéique cible déterminée peut être obtenue;

3. Peut déterminer jusqu'à 70 séquences d'acides aminés à l'extrémité n de la protéine;

4. Plusieurs formes d'échantillons peuvent être déterminées: solution de protéine, bande de protéine de PVDF;

5. Faible quantité d'échantillon: l'échantillon de protéine a besoin de seulement 5 - 10ug pour compléter l'essai;

Le séquençage n'est pas affecté par les modifications n - terminales telles que la fermeture n - terminale, la Pec et la glycosylation.

II. Dànbáizhì omique

Utilisant la plate - forme de spectrométrie de masse orbitrap fusion Lumos de thermo Fisher en combinaison avec Nano - LC, petitpeck Biotechnology fournit de nombreux services d'analyse dànbáizhìomique tels que la dànbáizhìomique quantitative, la dànbáizhìomique ciblée, la polypeptidomique, la protéomique modifiée post - traductionnelle et bien plus encore. En outre, petitpack Biotech a lancé un nouveau service de 4ddànbáizhì basé sur timstof pro, qui facilite les travaux de recherche tels que la protéomique à micro - échantillons, la médecine à grands échantillons et la modification à haut débit.

※ avantage de service:

1. Analyse quantitative des protéines à haut débit: analyse expérimentale à grande échelle par groupe multicontrôle, découverte de nouveaux biomarqueurs;

2. In Vivo In vitro de nombreuses méthodes de marquage dànbáizhì, adaptées à l'analyse de nombreux échantillons de tissus, de cellules, de sang, etc.;

3. Haute sensibilité d'analyse de spectrométrie de masse, haute répétition des résultats expérimentaux;

4. Protéines de faible abondance détectables, large gamme linéaire;

5. Zhuānyè analyse Bioinformatique, l'analyse est plus systématique et précise.

Iii. Analyse technique en flux par spectrométrie de masse unicellulaire

La biotechnologie de battlepike utilise le système de flux de spectrométrie de masse de fluidigm pour l'analyse de la technologie de flux de spectrométrie de masse unicellulaire, utilisant des marqueurs d'éléments métalliques (généralement des anticorps spécifiques marqués par des éléments métalliques) pour marquer les molécules à la surface et à l'intérieur des cellules, puis isolant les cellules individuelles avec le principe de cellules de flux, puis analysant le spectre de masse atomique des cellules individuelles par spectrométrie de masse à plasma inductif (ICP - MS), zuì après avoir converti les données du spectre de masse atomique en poids d'expression moléculaire signal à la surface et à l'intérieur des cellules.

※ avantage de service:

1. Technologie avancée pour combler les lacunes technologiques

L'utilisation de la technologie d'anticorps de marquage métallique évite le problème des canaux fluorescents en flux traditionnels qui sont peu nombreux et susceptibles d'interagir les uns avec les autres. Avec la caractérisation simultanée de plusieurs indicateurs au niveau unicellulaire, la biotechnologie de petapock peut détecter simultanément 51 protéines cibles.

2. Grand nombre d'analyses, coût inférieur

Rnaseq unicellulaire est limitée par le coût et d'autres facteurs, le nombre d'analyses de toutes les cellules de l'échantillon est généralement d'environ 2 x 10 ^ 4, tandis que la spectrométrie de masse en flux une fois (échantillon unique) peut analyser au moins 10 ^ 5 cellules, ce qui permet d'obtenir des améliorations de L'ordre de grandeur, et le coût n'est pas plus élevé que le rnaseq unicellulaire.

3. Grandes perspectives d'application

① les résultats de la spectrométrie de masse en flux peuvent donner des changements dans les sous - populations cellulaires, avec de grandes perspectives de recherche dans le diagnostic clinique, l'étude des mécanismes de la maladie, etc.;

② combiner la technologie d'étiquette métallique avec d'autres technologies aura une nouvelle direction d'application. En plus des protéines conventionnelles, la technologie cellulaire en flux par spectrométrie de masse peut également être utilisée pour la modification post - traductionnelle des protéines;

③ peut détecter la survie cellulaire, la taille des cellules, la quantité d'expression des transcripteurs d'ARNm, le taux de synthèse de l'ADN, ainsi que l'activité de la protéase, etc.

Analyse immunopolypeptidomique basée sur la spectrométrie de masse de haute précision et découverte de nouveaux antigènes

La solution unique d'analyse immunopolypeptidomique et de découverte de nouveaux antigènes basée sur la spectrométrie de masse de haute précision de battlepike Biotechnology comprend notre programme exclusif d'enrichissement et d'identification d'immunopeptides hautement sensibles. Nous sommes en mesure de vous aider à identifier et identifier plus de 10 000 Polypeptides de type I et plus de 10 000 Polypeptides de type II. L'analyse immunopeptidomique via notre plate - forme d'analyse immunopolypeptidomique optimisée à haut débit permet une identification et une quantification reproductibles à partir de matériaux d'échantillon de petite taille. Le service peut être appliqué à la recherche à grande échelle et vise à aider les chercheurs à trouver des solutions au cancer, aux maladies immunitaires et aux maladies infectieuses, en explorant des cibles inconnues.

V. caractérisation des médicaments biologiques

Batepeck est basé sur la technologie de spectrométrie de masse à haute résolution, MALDI TOF， Technologie de séparation chromatographique à haute efficacité, offrant une gamme de protocoles d'analyse biopharmaceutique pour wánshàn, allant de la composition en acides aminés et de l'analyse structurale primaire de produits biologiques tels que dànbáizhì, POLYPEPTIDES, anticorps, vaccins, à l'analyse de la variabilité et de la pureté du produit. Vise à fournir des services d'analyse biopharmaceutique de haute qualité pour aider les fabricants de médicaments biologiques à améliorer la qualité des médicaments biologiques.

Les sept plates - formes d'inspection de la biotechnologie de battlepike

Petitpeck Biotechnology - caractérisation de produits biologiques, Service de qualité multiomique en spectrométrie de masse biologique

Beijing BaiTai Pike Biotech Co., Ltd. S'engage à fournir des services zhuānyè tels que l'inspection de contrôle de qualité et la vérification de projet pour les industries biologiques / pharmaceutiques et des dispositifs médicaux. Le laboratoire de la société suit les règlements et les directives de la nmpa, de l'ich, de la FDA et de l'EMA, etc., avec la double certification du système de qualité CNAS / ISO9001, un système de qualité complet a été établi, les données sont sauvegardées à chaud et à froid / hors site, les équipements sont régulièrement mesurés / vérifiés pendant la période, le suivi de l'audit logiciel, la solution tout - en - un et les services techniques sont fournis aux clients pour soutenir la recherche et le développement de nouveaux médicaments, l'enregistrement des déclarations de médicaments et la libération de la production.

1. La société adopte le système de contrôle de qualité ISO9001, zhuānyè fournit des services d'analyse de détection cro basés sur la spectrométrie de masse;

2. Reconnu par le laboratoire national CNAS pour fournir aux clients des services de recherche de qualité pharmaceutique conformes à la réglementation pharmaceutique mondiale;

3. Le domaine d'activité couvre dànbáizhì omics, polypeptidomics, Metabolomics, caractérisation biopharmaceutique, analyse unicellulaire, flux de spectrométrie de masse unicellulaire, analyse de nuage de Genesis et analyse intégrée de spectrométrie de masse biologique multiomics, etc.;

4. Sept plates - formes d'inspection de contrôle de qualité pour répondre à vos besoins de service à guichet unique;

5. Service 3000 + entreprises, 10000 + choix du client;

6. Dédié à vous fournir un excellent service d'analyse de spectrométrie de masse biologique!

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