- Courriel
- Téléphone
-
Adresse
Nouveau quartier Pudong, Shanghai
Catégories de produits
Shanghai beibo biotechnologie Co., Ltd
Kit de détection d'apoptose apoptose cellulaire Annexin V
NégociableMise à jour sur05/06
- Modèle
- Nature du fabricant
- producteurs
- Catégorie de produit
- Lieu d'origine
Vue d'ensemble
Le kit de détection d'apoptose Annexin V - APC est une protéine de liaison aux Phospholipides Ca2 + dépendante d'un poids moléculaire de 35 à 36 KD qui se lie spécifiquement à l'hyperphilie ps et à la force qui est retournée à l'extérieur de la membrane pendant l'apoptose. L'inversion de la PS se produit avant la rupture du noyau, la fragmentation de l'ADN et l'apparition de protéines liées à l'apoptose, ce qui rend la liaison de l'annexine V à la PS précoce. ...
Détails du produit
Apoptose de l'annexine VIntroduction aux kits de détection
Température de conservation:2 - 8 ℃ protégé de la lumière
Apoptose de l'annexine VKits de détectionPrécautions
1. Il ne peut pas être conservé à - 20 ℃ à long terme.
2. Annexin V - APC colorant pour éviter la congélation et la dégel répétées. Plusieurs gelées provoquent une défaillance.
3. Annexin V - APC solution de teinture peut être conservée après - 20 ℃ en petites portions en fonction de l'utilisation lorsque la conservation à long terme est nécessaire.
4. S'il vous plaît terminer l'utilisation dès que possible après le déballage du réactif!
2. Annexin V - APC colorant pour éviter la congélation et la dégel répétées. Plusieurs gelées provoquent une défaillance.
3. Annexin V - APC solution de teinture peut être conservée après - 20 ℃ en petites portions en fonction de l'utilisation lorsque la conservation à long terme est nécessaire.
4. S'il vous plaît terminer l'utilisation dès que possible après le déballage du réactif!
Période de validité
1 année
Méthode de détection
1. Cytomètre de flux
2. Co - focus laser
3. Microscope à fluorescence
2. Co - focus laser
3. Microscope à fluorescence
Échantillons applicables
1. Cellules en suspension
2. Cellules plaquées
2. Cellules plaquées
Caractéristiques du produit
1. Pratique: cytomètre de flux ou microscope à fluorescence disponible pour la détection;
2. Rapide: l'expérience peut être terminée en 1 heure;
3. Précision: peut distinguer avec précision les cellules vivantes, les cellules apoptotiques et les cellules nécrotiques, et compter la proportion de chaque population de cellules.
2. Rapide: l'expérience peut être terminée en 1 heure;
3. Précision: peut distinguer avec précision les cellules vivantes, les cellules apoptotiques et les cellules nécrotiques, et compter la proportion de chaque population de cellules.
Application du produit
1. Cytomètre de flux
2. Co - focus laser
3. Microscope à fluorescence
2. Co - focus laser
3. Microscope à fluorescence
Préparation des instruments
1. Cytométrie de flux ou microscope à fluorescence ou confocation laser
2. Centrifugeuse
3. Pipette
4. Réfrigérateur
5. Boîte à glace
2. Centrifugeuse
3. Pipette
4. Réfrigérateur
5. Boîte à glace
Préparation des réactifs
Tampon PBS (pH 7,4, Solution tampon phosphate 10mm (1X) couramment utilisée en laboratoire)
Hbss (hank’s Balanced Salt Solution)
Hbss (hank’s Balanced Salt Solution)
Préparation des consommables
1. Tube de centrifugation
2. Tête d'aspiration
3. Gants jetables
4. Feuille d'aluminium
2. Tête d'aspiration
3. Gants jetables
4. Feuille d'aluminium
Apoptose de l'annexine VKits de détectionPrécautions d'utilisation
1. Bouchon à vis micro réactif tube contenant des réactifs avant d'ouvrir le couvercle s'il vous plaît centrifuger brièvement, recueillir le liquide sur la paroi intérieure du couvercle au fond du tube, éviter la perte de liquide lors de l'ouverture du couvercle conduit à une quantité insuffisante de réactif.
2. Le traitement cellulaire doit être manipulé avec soin et essayer d'éviter les cellules endommagées artificiellement. La force centrifuge est aussi petite que possible sans perte de cellules, la remise en suspension des cellules est l'action à faire doucement, en évitant plusieurs coups répétés et intenses. Pas d'oscillateur Scroll.
3. Annexin V - FITC (etc.) et Propidium iodide (etc.) sont des substances photosensibles, faites attention à éviter la lumière lors de l'opération, minimisez leur temps d'exposition à la lumière. Utilisez une boîte à glace avec couvercle ou du papier aluminium pour éviter la lumière si nécessaire. Maintenir les cellules dans un environnement protégé de la lumière après le marquage. Une brève exposition à la lumière (< 30 secondes) pendant le pipetage est acceptable.
4. Comme l'apoptose est un processus rapide et dynamique, l'analyse est effectuée immédiatement après la coloration.
2. Le traitement cellulaire doit être manipulé avec soin et essayer d'éviter les cellules endommagées artificiellement. La force centrifuge est aussi petite que possible sans perte de cellules, la remise en suspension des cellules est l'action à faire doucement, en évitant plusieurs coups répétés et intenses. Pas d'oscillateur Scroll.
3. Annexin V - FITC (etc.) et Propidium iodide (etc.) sont des substances photosensibles, faites attention à éviter la lumière lors de l'opération, minimisez leur temps d'exposition à la lumière. Utilisez une boîte à glace avec couvercle ou du papier aluminium pour éviter la lumière si nécessaire. Maintenir les cellules dans un environnement protégé de la lumière après le marquage. Une brève exposition à la lumière (< 30 secondes) pendant le pipetage est acceptable.
4. Comme l'apoptose est un processus rapide et dynamique, l'analyse est effectuée immédiatement après la coloration.
5. L'utilisation du kit Annexin V - FITC (etc.) pour détecter l'apoptose nécessite de cibler les cellules vivantes. Ne pas fixer les cellules, l'opération de fixation peut interférer avec le résultat.
Méthode d'utilisation
Coloration des échantillons:
1. Centrifuger pour recueillir les cellules en suspension. Centrifugeuse 300 × G - 500 × G force, 2 - 8 ° C, temps de centrifugation 5 min, milieu de culture abandonné.
2. Laver les cellules deux fois avec du PBS froid. (300 × G - 400 × G, 2 - 8°c, temps de centrifugation 5 min pour collecter les cellules).
3. Suspendre les cellules avec 100 µl de solution de liaison 1x Annexin V à une concentration d'environ 1 - 5 x 106 cellules / ML.
Ajouter 5 µl de colorant Annexin V - APC à la suspension cellulaire et incuber à l'abri de la lumière à 2 - 8 ° C pendant 5 - 15 minutes après malaxage doux.
5. Mélanger délicatement et incuber à 2 - 8 ° C à l'abri de la lumière pendant 1 - 3 minutes après avoir ajouté la solution de coloration Pi (ou 7 - AAD). (cette étape est sélectionnée, selon les besoins de l'expérience, vous pouvez également ne faire qu'une seule teinte APC).
6. Ajouter 400 μl de PBS ou 1x Annexin V solution de liaison et mélanger doucement.
7. Détection immédiate avec cytomètre de flux.
Analyse cytométrique en flux:
Les cellules traitées peuvent à ce stade être analysées sur cytomètre de flux.
Il suffit de suivre les opérations classiques de détection d'apoptose en flux.
Annexin V - APC a une longueur d'onde d'excitation de fluorescence de 652 m et une longueur d'onde d'émission de 670 m; PI Fluorescence longueur d'onde d'excitation de 535 m et une longueur d'onde d'émission de 620 m.
Avant le test de mise en route, l'échantillon de contrôle de la qualité doit être préparé avec les cellules à tester pour définir la compensation de fluorescence du cytomètre de flux et définir la gamme de portes croisées:
(i) cellules non transfectées avec des marqueurs tels que GFP
① tube blanc: cellules de contrôle négatives, cellules sans coloration. Sans Annexin V / APC, PI. Pour réguler la tension.
② tube mono - infecté: cellules avec apoptose marquée, coloré uniquement avec Annexin V / APC. Pour réguler la compensation.
③ tube mono - infecté: cellules avec apoptose marquée, avec coloration Pi seulement. Pour réguler la compensation
④ tube de détection: cellules traitées à tester, plus annexine V / APC, PI. Après avoir réglé une bonne compensation de tension avec un tube vierge et un seul tube mâle, les données de flux requises sont obtenues.
(II) transfection des cellules GFP
① tubes vierges non transfectés: cellules non transfectées, cellules témoins négatives, cellules non colorées. Sans Annexin V / APC, PI. Pour réguler la tension.
② transfecté GFP Blank tube: cellules témoins transfectées GFP, cellules sans coloration. Sans Annexin V / APC, PI. Pour ajuster la compensation
③ tubes mono - transfectés non transfectés: cellules non transfectées et présentant une apoptose marquée, colorées uniquement par annexine V / APC. Pour réguler la compensation.
④ tube mono - infecté non transfecté: cellules non transfectées et présentant une apoptose marquée, colorées uniquement par pi. Pour réguler la compensation
⑤ tube de détection: cellules traitées à tester, plus annexine V / APC, PI. Après avoir réglé une bonne compensation de tension avec un tube vierge et un seul tube mâle, les données de flux requises sont obtenues.
1. Centrifuger pour recueillir les cellules en suspension. Centrifugeuse 300 × G - 500 × G force, 2 - 8 ° C, temps de centrifugation 5 min, milieu de culture abandonné.
2. Laver les cellules deux fois avec du PBS froid. (300 × G - 400 × G, 2 - 8°c, temps de centrifugation 5 min pour collecter les cellules).
3. Suspendre les cellules avec 100 µl de solution de liaison 1x Annexin V à une concentration d'environ 1 - 5 x 106 cellules / ML.
Ajouter 5 µl de colorant Annexin V - APC à la suspension cellulaire et incuber à l'abri de la lumière à 2 - 8 ° C pendant 5 - 15 minutes après malaxage doux.
5. Mélanger délicatement et incuber à 2 - 8 ° C à l'abri de la lumière pendant 1 - 3 minutes après avoir ajouté la solution de coloration Pi (ou 7 - AAD). (cette étape est sélectionnée, selon les besoins de l'expérience, vous pouvez également ne faire qu'une seule teinte APC).
6. Ajouter 400 μl de PBS ou 1x Annexin V solution de liaison et mélanger doucement.
7. Détection immédiate avec cytomètre de flux.
Analyse cytométrique en flux:
Les cellules traitées peuvent à ce stade être analysées sur cytomètre de flux.
Il suffit de suivre les opérations classiques de détection d'apoptose en flux.
Annexin V - APC a une longueur d'onde d'excitation de fluorescence de 652 m et une longueur d'onde d'émission de 670 m; PI Fluorescence longueur d'onde d'excitation de 535 m et une longueur d'onde d'émission de 620 m.
Avant le test de mise en route, l'échantillon de contrôle de la qualité doit être préparé avec les cellules à tester pour définir la compensation de fluorescence du cytomètre de flux et définir la gamme de portes croisées:
(i) cellules non transfectées avec des marqueurs tels que GFP
① tube blanc: cellules de contrôle négatives, cellules sans coloration. Sans Annexin V / APC, PI. Pour réguler la tension.
② tube mono - infecté: cellules avec apoptose marquée, coloré uniquement avec Annexin V / APC. Pour réguler la compensation.
③ tube mono - infecté: cellules avec apoptose marquée, avec coloration Pi seulement. Pour réguler la compensation
④ tube de détection: cellules traitées à tester, plus annexine V / APC, PI. Après avoir réglé une bonne compensation de tension avec un tube vierge et un seul tube mâle, les données de flux requises sont obtenues.
(II) transfection des cellules GFP
① tubes vierges non transfectés: cellules non transfectées, cellules témoins négatives, cellules non colorées. Sans Annexin V / APC, PI. Pour réguler la tension.
② transfecté GFP Blank tube: cellules témoins transfectées GFP, cellules sans coloration. Sans Annexin V / APC, PI. Pour ajuster la compensation
③ tubes mono - transfectés non transfectés: cellules non transfectées et présentant une apoptose marquée, colorées uniquement par annexine V / APC. Pour réguler la compensation.
④ tube mono - infecté non transfecté: cellules non transfectées et présentant une apoptose marquée, colorées uniquement par pi. Pour réguler la compensation
⑤ tube de détection: cellules traitées à tester, plus annexine V / APC, PI. Après avoir réglé une bonne compensation de tension avec un tube vierge et un seul tube mâle, les données de flux requises sont obtenues.
Analyse des questions fréquemment posées
Annexin V n'est pas coloré ou a un faible taux de positivité au cours de l'expérience. Les causes possibles sont les suivantes:
1. Cytomètre de flux / microscope mal réglé pour la détection. Réglage utilisez les paramètres d'instrument appropriés.
2. Déterminer si l'inducteur dans l'expérience peut produire l'apoptose. Cela peut être exclu en établissant un contrôle positif du médicament pour l'effet exact d'induction de l'apoptose.
3. Les cellules n'initient pas l'apoptose. Déterminer à nouveau le moment de l'initiation de l'apoptose après induction (expérience de temporisation).
4. Le nombre de cellules est faible. Augmenter le nombre de cellules.
5. Mauvaise digestion des cellules collées. La liaison de l'annexine V au PS nécessite des ions Ca2 +, le liquide de liaison contient du Ca2 +, la digestion de l'EDTA affecte la coloration, il est recommandé d'utiliser un sans EDTA ou de le laver avec du PBS après digestion.
Le taux de positivité est élevé au cours de l'expérience. Les causes possibles sont les suivantes:
1. Cytomètre de flux / microscope mal réglé pour la détection. Réglage utilisez les paramètres d'instrument appropriés.
2. La cellule elle - même est trop pauvre en vitalité. La proportion de cellules doublement positives pour annexinv + / pi + après coloration dans les cellules témoins non induites par apoptose a été jugée excessive dans les expériences, ce qui peut être dû à une trop mauvaise viabilité des cellules elles - mêmes. Il est recommandé de calculer la viabilité des cellules par coloration au bleu Trypan, qui doit être supérieure à 95%. Si la vitalité est faible, il est recommandé de réanimer les cellules, généralement les cellules fraîchement réanimées ne sont pas testées avant au moins 3 passages.
1. Cytomètre de flux / microscope mal réglé pour la détection. Réglage utilisez les paramètres d'instrument appropriés.
2. Déterminer si l'inducteur dans l'expérience peut produire l'apoptose. Cela peut être exclu en établissant un contrôle positif du médicament pour l'effet exact d'induction de l'apoptose.
3. Les cellules n'initient pas l'apoptose. Déterminer à nouveau le moment de l'initiation de l'apoptose après induction (expérience de temporisation).
4. Le nombre de cellules est faible. Augmenter le nombre de cellules.
5. Mauvaise digestion des cellules collées. La liaison de l'annexine V au PS nécessite des ions Ca2 +, le liquide de liaison contient du Ca2 +, la digestion de l'EDTA affecte la coloration, il est recommandé d'utiliser un sans EDTA ou de le laver avec du PBS après digestion.
Le taux de positivité est élevé au cours de l'expérience. Les causes possibles sont les suivantes:
1. Cytomètre de flux / microscope mal réglé pour la détection. Réglage utilisez les paramètres d'instrument appropriés.
2. La cellule elle - même est trop pauvre en vitalité. La proportion de cellules doublement positives pour annexinv + / pi + après coloration dans les cellules témoins non induites par apoptose a été jugée excessive dans les expériences, ce qui peut être dû à une trop mauvaise viabilité des cellules elles - mêmes. Il est recommandé de calculer la viabilité des cellules par coloration au bleu Trypan, qui doit être supérieure à 95%. Si la vitalité est faible, il est recommandé de réanimer les cellules, généralement les cellules fraîchement réanimées ne sont pas testées avant au moins 3 passages.
Produit similaire Recommander
