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Adresse
Nouveau quartier Pudong, Shanghai
Catégories de produits
Shanghai beibo biotechnologie Co., Ltd
Total Protein Extraction Kit caractéristiques Notes
NégociableMise à jour sur05/06
- Modèle
- Nature du fabricant
- producteurs
- Catégorie de produit
- Lieu d'origine
Vue d'ensemble
Les kits d'extraction de protéines totales contiennent des formulations capables de solubiliser efficacement les composants de la membrane cellulaire, y compris la membrane cytoplasmique, la Membrane nucléaire et les différentes Membranes Organelles. Le mélange d'inhibiteurs de protéase contenu dans ce kit, qui empêche la dégradation des protéines par les protéases, garantit l'extraction de protéines de haute pureté.
Détails du produit
Température de conservation2-8℃
Kit d'extraction de protéines totalesPrécautions
1. L'inhibiteur de protéase peut également être stocké à 2 - 8 ℃ avant utilisation sans le couvercle ouvert. Stocker à - 20 ° c après utilisation avec le couvercle ouvert.
2. L'inhibiteur de protéase à 2 - 8 ℃ à basse température est à l'état solide, après le retrait du réfrigérateur à la température ambiante ou 37 ℃ bain d'eau de courte durée, devient à l'état liquide après centrifugation au fond du tube pour rouvrir le couvercle.
3. S'il vous plaît finir d'utiliser le réactif dès que possible après le déballage!
2. L'inhibiteur de protéase à 2 - 8 ℃ à basse température est à l'état solide, après le retrait du réfrigérateur à la température ambiante ou 37 ℃ bain d'eau de courte durée, devient à l'état liquide après centrifugation au fond du tube pour rouvrir le couvercle.
3. S'il vous plaît finir d'utiliser le réactif dès que possible après le déballage!
Durée de validité
un an
Méthode de détection
WB, IP, co-IP, ELISA, EMSA 等
Échantillons applicables
Cellules / tissus animaux
Kit d'extraction de protéines totalesCaractéristiques du produit
1. Facile à utiliser, l'extraction des protéines des cellules, des tissus n'a pas besoin d'être traitée avant le broyage, la congélation et la dégel répétées, la fragmentation par ultrasons, etc.
2. Le processus d'extraction est simple et pratique, réduisant le temps d'extraction des protéines à 30 minutes - 1 heure.
3. Contient des stabilisateurs de protéines, les protéines extraites sont stables.
4. L'interférence de fond est faible lorsque la concentration de protéine de détection UV.
L'extrait de protéine totale contient une variété de composants efficaces, peut libérer suffisamment de protéines cytoplasmiques, nucléaires et membranaires, et peut également se lier aux protéines libérées pour empêcher la précipitation.
6. Les inhibiteurs de protéase inhibent la dégradation des protéines et la formulation des inhibiteurs de protéase est optimisée. Le mélange d'inhibiteurs de protéase contient 6 inhibiteurs de protéase indépendants, aebsf, APROTININ, leupeptin, pepstatin a, bestatin, e - 64, chacun inhibant spécifiquement une ou plusieurs activités de protéase. La composition optimisée de ce mélange permet d'inhiber pratiquement toutes les activités protéases importantes, y compris les protéases, les hémiprotéases, les protéases aspartates, les Alanyl aminopeptidases, etc.
2. Le processus d'extraction est simple et pratique, réduisant le temps d'extraction des protéines à 30 minutes - 1 heure.
3. Contient des stabilisateurs de protéines, les protéines extraites sont stables.
4. L'interférence de fond est faible lorsque la concentration de protéine de détection UV.
L'extrait de protéine totale contient une variété de composants efficaces, peut libérer suffisamment de protéines cytoplasmiques, nucléaires et membranaires, et peut également se lier aux protéines libérées pour empêcher la précipitation.
6. Les inhibiteurs de protéase inhibent la dégradation des protéines et la formulation des inhibiteurs de protéase est optimisée. Le mélange d'inhibiteurs de protéase contient 6 inhibiteurs de protéase indépendants, aebsf, APROTININ, leupeptin, pepstatin a, bestatin, e - 64, chacun inhibant spécifiquement une ou plusieurs activités de protéase. La composition optimisée de ce mélange permet d'inhiber pratiquement toutes les activités protéases importantes, y compris les protéases, les hémiprotéases, les protéases aspartates, les Alanyl aminopeptidases, etc.
Application du produit
WB, IP, co-IP, ELISA, EMSA 等
Préparation des instruments
1. Centrifugeuse
2. Oscillateur
3. Homogénateur / homogénateur
4. Mélangeur vortex
5. Pipette
6. Réfrigérateur
7. Boîte à glace
2. Oscillateur
3. Homogénateur / homogénateur
4. Mélangeur vortex
5. Pipette
6. Réfrigérateur
7. Boîte à glace
Préparation des réactifs
1. Tampon PBS
2. Kit de quantification des protéines
2. Kit de quantification des protéines
Préparation des consommables
1. Tube de centrifugation
2. Tête d'aspiration
3. Gants jetables
2. Tête d'aspiration
3. Gants jetables
Précautions d'utilisation
centrifuger le réactif du tube à capuchon rotatif avant d'ouvrir le couvercle, veuillez centrifuger brièvement, jeter le liquide sur la paroi interne du couvercle au fond du tube, éviter les gicleurs de liquide lors de l'ouverture du couvercle.
l'inhibiteur de protéase à 2 - 8 ℃ est à l'état solide, après le retrait du réfrigérateur à la température ambiante ou 37 ℃ bain d'eau de courte durée, devient à l'état liquide après centrifugation au fond du tube pour rouvrir le couvercle.
Tous les réactifs pendant l'expérience doivent être pré - refroidis; Tous les ustensiles doivent être refroidis au réfrigérateur à - 20 ° c. L'ensemble du processus doit maintenir l'échantillon à basse température.
inhibiteur de protéase pendant le stockage de la solution s'il y a précipitation, n'affecte pas l'utilisation, après dissolution, l'utilisation normale.
si le kit ne peut pas être utilisé dans un court laps de temps, le mélange d'inhibiteurs de protéase ne peut pas être ajouté au liquide d'extraction tout à la fois.
d'autres inhibiteurs de protéase peuvent être ajoutés en fonction de vos propres besoins expérimentaux.
expériences en aval si la détection de l'activité enzymatique d'une protéase ou d'une phosphatase particulière est effectuée, le liquide d'extraction peut être exempt d'inhibiteurs de protéase ou d'inhibiteurs de phosphatase, en prenant soin du processus d'extraction pour maintenir le fonctionnement à basse température et réduire le temps de centrifugation.
Les tests Western Blot peuvent être sélectionnés en Beta - Actin, GAPDH et tubulin.
La vitesse de rotation de la centrifugeuse est représentée par la force centrifuge relative (RCF, × g) et la vitesse de rotation par minute (RPM, R / min), certaines centrifugeuses sont configurées avec la commutation d'affichage RPM et × G, mais certaines centrifugeuses n'ont pas de fonction de commutation automatique. La conversion doit être effectuée avec la formule suivante: G = r × 1188 × 10 - 5 × tr / min 2 (R étant le rayon effectif de centrifugation, c'est - à - dire la longueur en centimètres de l'axe de la centrifugeuse à la position centrale inférieure du tube collecteur de centrifugation) par exemple: avec une vitesse de rotation de 3000 tr / min et un rayon effectif de centrifugation de 10 cm, la force centrifuge relative (RCF, × g) est = 10 × 1188 × 10 - 5 × 30002 = 1006,2 (× g).
l'inhibiteur de protéase à 2 - 8 ℃ est à l'état solide, après le retrait du réfrigérateur à la température ambiante ou 37 ℃ bain d'eau de courte durée, devient à l'état liquide après centrifugation au fond du tube pour rouvrir le couvercle.
Tous les réactifs pendant l'expérience doivent être pré - refroidis; Tous les ustensiles doivent être refroidis au réfrigérateur à - 20 ° c. L'ensemble du processus doit maintenir l'échantillon à basse température.
inhibiteur de protéase pendant le stockage de la solution s'il y a précipitation, n'affecte pas l'utilisation, après dissolution, l'utilisation normale.
si le kit ne peut pas être utilisé dans un court laps de temps, le mélange d'inhibiteurs de protéase ne peut pas être ajouté au liquide d'extraction tout à la fois.
d'autres inhibiteurs de protéase peuvent être ajoutés en fonction de vos propres besoins expérimentaux.
expériences en aval si la détection de l'activité enzymatique d'une protéase ou d'une phosphatase particulière est effectuée, le liquide d'extraction peut être exempt d'inhibiteurs de protéase ou d'inhibiteurs de phosphatase, en prenant soin du processus d'extraction pour maintenir le fonctionnement à basse température et réduire le temps de centrifugation.
Les tests Western Blot peuvent être sélectionnés en Beta - Actin, GAPDH et tubulin.
La vitesse de rotation de la centrifugeuse est représentée par la force centrifuge relative (RCF, × g) et la vitesse de rotation par minute (RPM, R / min), certaines centrifugeuses sont configurées avec la commutation d'affichage RPM et × G, mais certaines centrifugeuses n'ont pas de fonction de commutation automatique. La conversion doit être effectuée avec la formule suivante: G = r × 1188 × 10 - 5 × tr / min 2 (R étant le rayon effectif de centrifugation, c'est - à - dire la longueur en centimètres de l'axe de la centrifugeuse à la position centrale inférieure du tube collecteur de centrifugation) par exemple: avec une vitesse de rotation de 3000 tr / min et un rayon effectif de centrifugation de 10 cm, la force centrifuge relative (RCF, × g) est = 10 × 1188 × 10 - 5 × 30002 = 1006,2 (× g).
mode d'emploi
Extraction des protéines totales de l'échantillon cellulaire:
Extraction de protéines cellulaires en suspension:
1. Préparation du liquide d'extraction:
Ajouter 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de protéase et 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de phosphatase pour 500 µl d'extrait de protéine total froid, mélanger et laisser reposer sur la glace.
2. Prendre 5 x 106 cellules, centrifuger à 4 ° C, 2500 × g pendant 5 minutes, aspirer soigneusement le milieu, aspirer autant que possible, recueillir les cellules.
3. Lavez les cellules deux fois avec du PBS froid, en aspirant le plus clair possible après chaque lavage.
Ajouter 500 µl d'extrait de protéines totales froides par 5 × 106 - 1 × 107 cellules (environ 50 mg de cellules / 50 µl de volume de précipitation cellulaire), après mélange par soufflage, osciller à 4 ° C pendant 20 - 30 minutes jusqu'à ce que les cellules soient suffisamment lysées sans précipitation cellulaire significative.
5. Centrifuger à 4 ° C, 12 000 × g pendant 15 minutes.
6. Aspirer le surnageant dans un autre tube de centrifugation propre pré - refroidi pour obtenir des protéines totales.
7. Après la quantification de l'extrait de protéine ci - dessus dans le réfrigérateur à - 80 ℃ pour la sauvegarde ou directement pour les expériences en aval.
Extraction des protéines des cellules adhérentes:
1. Préparation du liquide d'extraction:
Ajouter 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de protéase et 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de phosphatase pour 500 µl d'extrait de protéine total froid, mélanger et laisser reposer sur la glace.
2. Aspirer soigneusement le liquide de culture des cellules plaquées.
3. Lavez les cellules deux fois avec du PBS froid et aspirez le PBS autant que possible après chaque lavage.
4. Ajouter la bonne quantité d'extrait de protéines totales froides, osciller pendant 15 - 30 minutes, jusqu'à ce que les cellules soient suffisamment lysées, gratter à l'aide d'un racleur cellulaire et aspirer le lysat dans un autre tube de centrifugation propre.
5. Centrifuger à 4 ° C, 12 000 × g pendant 15 minutes.
6. Aspirer le surnageant dans un autre tube de centrifugation propre pré - refroidi, c'est - à - dire obtenir des protéines totales.
7. Après la quantification de l'extrait de protéine ci - dessus dans le réfrigérateur à - 80 ℃ pour la sauvegarde ou directement pour les expériences en aval.
Extraction de protéines totales d'échantillons de tissus:
1. Préparation du liquide d'extraction:
Ajouter 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de protéase et 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de phosphatase pour 500 µl d'extrait de protéine total froid, mélanger et laisser reposer sur la glace.
2. Prenez un échantillon de tissu de 50 à 100 mg, lavez - le avec du PBS, puis coupez - le au couteau autant que possible, ajoutez 500 μl d'extrait de protéines totales et homogénéisez - le avec un homogénateur de tissu / homogénateur jusqu'à ce qu'aucun solide visible à l'œil nu ne soit visible.
3. Aspirer l'homogénat de tissu dans un tube de centrifugation propre pré - refroidi et agiter à 4 ℃ pendant 10 - 20 minutes.
4. Centrifuger à 4 ° C, 10 000 - 14 000 × g pendant 15 minutes.
5. Aspirer le surnageant dans un autre tube de centrifugation propre pré - refroidi, c'est - à - dire obtenir des protéines totales.
6. Après la quantification de l'extrait de protéine ci - dessus dans le réfrigérateur à - 80 ℃ pour la sauvegarde ou directement pour les expériences en aval.
Extraction de protéines cellulaires en suspension:
1. Préparation du liquide d'extraction:
Ajouter 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de protéase et 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de phosphatase pour 500 µl d'extrait de protéine total froid, mélanger et laisser reposer sur la glace.
2. Prendre 5 x 106 cellules, centrifuger à 4 ° C, 2500 × g pendant 5 minutes, aspirer soigneusement le milieu, aspirer autant que possible, recueillir les cellules.
3. Lavez les cellules deux fois avec du PBS froid, en aspirant le plus clair possible après chaque lavage.
Ajouter 500 µl d'extrait de protéines totales froides par 5 × 106 - 1 × 107 cellules (environ 50 mg de cellules / 50 µl de volume de précipitation cellulaire), après mélange par soufflage, osciller à 4 ° C pendant 20 - 30 minutes jusqu'à ce que les cellules soient suffisamment lysées sans précipitation cellulaire significative.
5. Centrifuger à 4 ° C, 12 000 × g pendant 15 minutes.
6. Aspirer le surnageant dans un autre tube de centrifugation propre pré - refroidi pour obtenir des protéines totales.
7. Après la quantification de l'extrait de protéine ci - dessus dans le réfrigérateur à - 80 ℃ pour la sauvegarde ou directement pour les expériences en aval.
Extraction des protéines des cellules adhérentes:
1. Préparation du liquide d'extraction:
Ajouter 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de protéase et 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de phosphatase pour 500 µl d'extrait de protéine total froid, mélanger et laisser reposer sur la glace.
2. Aspirer soigneusement le liquide de culture des cellules plaquées.
3. Lavez les cellules deux fois avec du PBS froid et aspirez le PBS autant que possible après chaque lavage.
4. Ajouter la bonne quantité d'extrait de protéines totales froides, osciller pendant 15 - 30 minutes, jusqu'à ce que les cellules soient suffisamment lysées, gratter à l'aide d'un racleur cellulaire et aspirer le lysat dans un autre tube de centrifugation propre.
5. Centrifuger à 4 ° C, 12 000 × g pendant 15 minutes.
6. Aspirer le surnageant dans un autre tube de centrifugation propre pré - refroidi, c'est - à - dire obtenir des protéines totales.
7. Après la quantification de l'extrait de protéine ci - dessus dans le réfrigérateur à - 80 ℃ pour la sauvegarde ou directement pour les expériences en aval.
Extraction de protéines totales d'échantillons de tissus:
1. Préparation du liquide d'extraction:
Ajouter 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de protéase et 2 µl d'un mélange d'inhibiteurs de phosphatase pour 500 µl d'extrait de protéine total froid, mélanger et laisser reposer sur la glace.
2. Prenez un échantillon de tissu de 50 à 100 mg, lavez - le avec du PBS, puis coupez - le au couteau autant que possible, ajoutez 500 μl d'extrait de protéines totales et homogénéisez - le avec un homogénateur de tissu / homogénateur jusqu'à ce qu'aucun solide visible à l'œil nu ne soit visible.
3. Aspirer l'homogénat de tissu dans un tube de centrifugation propre pré - refroidi et agiter à 4 ℃ pendant 10 - 20 minutes.
4. Centrifuger à 4 ° C, 10 000 - 14 000 × g pendant 15 minutes.
5. Aspirer le surnageant dans un autre tube de centrifugation propre pré - refroidi, c'est - à - dire obtenir des protéines totales.
6. Après la quantification de l'extrait de protéine ci - dessus dans le réfrigérateur à - 80 ℃ pour la sauvegarde ou directement pour les expériences en aval.
Analyse des questions fréquemment posées
1. Faible concentration de protéines?
Il est possible qu'il n'y ait pas de lyse lors du traitement d'une partie de l'échantillon de tissu, ce qui entraîne de faibles concentrations de protéines. Il suffit de prolonger convenablement le temps de traitement du réactif a. Traité dans des conditions d'oscillation constante, il n'y a pas d'oscillateur qui peut également être mélangé par soufflage de la tête d'aspiration à quelques minutes d'intervalle.
2. Lyse cellulaire lente?
Afin de garantir pleinement l'activité de la protéine résultant de l'extraction, la formulation de la protéine protectrice adoptée par le liquide d'extraction, avec une capacité de lyse douce et une large gamme d'applications en aval. Une prolongation appropriée du temps de craquage suffit.
3. Quelle méthode pour quantifier les protéines?
La méthode BCA est recommandée. Il n'est pas approprié d'utiliser la méthode de Bradford, car le réactif a contient des composants qui interfèrent avec la méthode de Bradford, ce qui entraîne une quantification inadéquate. Si un traitement de dialyse a été effectué ou si le système tampon a été remplacé par une colonne de dessalement, il peut être quantifié par la méthode de Bradford.
4. Un précipité gélatineux se produit lors de l'extraction?
Une petite quantité de gomme transparente apparaît parfois dans les produits de traitement de l'extrait de protéines, un phénomène normal. Cette gomme transparente est un complexe contenant de l'ADN génomique, etc. En l'absence de détection et de liaison particulièrement étroite de l'ADN génomique à une protéine spécifique, il est possible de centrifuger directement le surnageant pour des expériences ultérieures; Si la détection et la liaison génomique à une protéine particulièrement serrée sont nécessaires, elles peuvent être réalisées par Sonication, à 300 W / 10 secondes d'intervalle de 10 secondes, par échographie pendant 3 minutes, suivie d'une centrifugation pour prélever le surnageant pour des expériences ultérieures. Lors de la détection de certains facteurs de transcription courants, tels que NF - kappab, p53, etc., il n'est pas nécessaire d'effectuer une échographie.
5. Les protéines extraites sont - elles actives?
Ce kit ne contient pas de composant détartrant ionique, ne détruit pas la structure de la protéine, ne perturbe pas l'interaction originale entre les protéines, les protéines conservent toutes leur conformation naturelle et leur activité.
Il est possible qu'il n'y ait pas de lyse lors du traitement d'une partie de l'échantillon de tissu, ce qui entraîne de faibles concentrations de protéines. Il suffit de prolonger convenablement le temps de traitement du réactif a. Traité dans des conditions d'oscillation constante, il n'y a pas d'oscillateur qui peut également être mélangé par soufflage de la tête d'aspiration à quelques minutes d'intervalle.
2. Lyse cellulaire lente?
Afin de garantir pleinement l'activité de la protéine résultant de l'extraction, la formulation de la protéine protectrice adoptée par le liquide d'extraction, avec une capacité de lyse douce et une large gamme d'applications en aval. Une prolongation appropriée du temps de craquage suffit.
3. Quelle méthode pour quantifier les protéines?
La méthode BCA est recommandée. Il n'est pas approprié d'utiliser la méthode de Bradford, car le réactif a contient des composants qui interfèrent avec la méthode de Bradford, ce qui entraîne une quantification inadéquate. Si un traitement de dialyse a été effectué ou si le système tampon a été remplacé par une colonne de dessalement, il peut être quantifié par la méthode de Bradford.
4. Un précipité gélatineux se produit lors de l'extraction?
Une petite quantité de gomme transparente apparaît parfois dans les produits de traitement de l'extrait de protéines, un phénomène normal. Cette gomme transparente est un complexe contenant de l'ADN génomique, etc. En l'absence de détection et de liaison particulièrement étroite de l'ADN génomique à une protéine spécifique, il est possible de centrifuger directement le surnageant pour des expériences ultérieures; Si la détection et la liaison génomique à une protéine particulièrement serrée sont nécessaires, elles peuvent être réalisées par Sonication, à 300 W / 10 secondes d'intervalle de 10 secondes, par échographie pendant 3 minutes, suivie d'une centrifugation pour prélever le surnageant pour des expériences ultérieures. Lors de la détection de certains facteurs de transcription courants, tels que NF - kappab, p53, etc., il n'est pas nécessaire d'effectuer une échographie.
5. Les protéines extraites sont - elles actives?
Ce kit ne contient pas de composant détartrant ionique, ne détruit pas la structure de la protéine, ne perturbe pas l'interaction originale entre les protéines, les protéines conservent toutes leur conformation naturelle et leur activité.
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