Cellules réceptrices DH5 aλpir *

Cellules réceptrices DH5 aλpir *

Nom du produit: DH5 αλpir Chemically Competent Cell
Numéro d'article du produit: g6018 - 10 (10 PCS 100ul), g6018 - 100 (100 Pcs 100ul)
Spécifications / Introduction: g6018 - 10 (10 bâtons 100ul), g6018 - 100 (100 bâtons 100ul)

Génotype

F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA--arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk-, mk+) supE44 λ-thi -1 gyrA96 relAl phoA

Brève description |

La souche clbio DH5a - inpir, dérivée de DH5a, introduit lampir, c'est - à - dire DH5a - inpir, dans le génome d'e. Coli DH5a, cette souche pouvant exprimer la protéine PIR de manière à ce que le plasmide contenant le réplicon ori r6kg puisse y être répliqué normalement. DH5a dans la souche PIR délétion de l'endonucléase (ENDA), ce qui améliore la production et la qualité de l'ADN plasmidique; La forme déficiente en Recombinase (recA) réduit la probabilité de recombinaison homologue du fragment inséré, garantissant la stabilité de l'ADN inséré; La présence de laczom15 rend le DH5a utilisable pour le criblage des taches bleues et blanches; Mais les souches DH5a - Input - PIR se développent plus lentement et devraient prolonger le temps de croissance lors de la culture de plaques ou de shakers liquides. Les cellules sensibles clbio dh5aλpir ont été fabriquées par un procédé spécial avec une efficacité de transformation > 1x109 CFU / µg d'ADN détectée par le plasmide pUC19.

Instructions de fonctionnement:

Les cellules réceptrices dh5aλpir sont sorties de - 80 ° C, rapidement insérées dans la glace, après 5 minutes, la masse à faire fondre, l'ADN d'intérêt (plasmide ou produit de liaison) est ajouté et le fond du tube EP est mélangé à la main et laissé reposer dans la glace pendant 25 minutes.

2.42 * c bain d'eau chaude pendant 45 secondes, remettre rapidement la glace. Mettez - le sur et laissez - le reposer pendant 2 minutes, et l'agitation réduira l'efficacité de la conversion.

3. Ajouter 700 μ1 de milieu LB stérile sans antibiotiques dans le tube de centrifugation, 37 ° c Après malaxage, 200 RPM réanimation pendant 70 minutes.

4. Centrifuger à 5000 RPM pendant 1 minute pour recueillir les bactéries, laisser environ 100 μl de surnageant et souffler doucement les morceaux lourds et appliquer sur le milieu LB contenant l'antibiotique correspondant.

5. Placez les plaques à l'envers dans un incubateur à 37 ° C pendant au moins 18 heures.

PrécautionsPour:

1. Cellules réceptricesconseilFondre lentement dans la glace. Insérer dans la glace ajouter l'ADN cible dans les 8 minutes, ne peut pas être laissé dans la glace trop longtemps, le stockage prolongé réduit l'efficacité de la transformation.

2. La souche dh5aλpir croît lentement et le temps de croissance de la bactérie (37 °C, plus de 18 heures) doit être prolongé lors de la culture de la bactérie sur des plaques ou lors de la culture de la bactérie Shaker liquide.

3. La conversion de concentrations élevées de plasmides ou de produits de liaison à haute efficacité peut réduire la quantité de bactéries utilisées à la fin de la plaque.

Cellules réceptrices DH5 aλpir *