Cellules réceptrices DH5a

Cellules réceptrices DH5a

Nom du produit: DH5a Chemically Competent Cell

Code Produit: g6016

Conditions de conservation: - 80°c

Numéro d'article, quantité, spécifications: g6016 - 20 (20 PCS 100u1), g6016 - 100 (100 Pcs 100u1) |

pUC19 (vecteur de contrôle) 10pg/ μ1; 10μ 1

Génotype

F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA-arg F) U169 endAl recAl

hsdR17 (rk-, mk+) supE44 λ-thi -1 gyrA96 relAl phoA

Instructions de fonctionnement |

1. CLBioCellules réceptrices DH5aMettre de la glace à fondre (ou laisser aller le cœur ou la température ambiante pendant un moment, insérer rapidement dans la glace lorsque la bactérie est dans un état de mélange eau - glace), ajouter l'ADN d'intérêt (plasmide ou produit de liaison) et frapper à la mainMélanger délicatement au fond du tube EP et laisser reposer sur la glace pendant 25 minutes.

2,42 ° C bain d'eau chaud pendant 45 secondes, remettre rapidement sur la glace et laisser reposer pendant 2 minutes, l'agitation réduira l'efficacité de la conversion.

3. Ajouter 700 μ1 de milieu stérile sans antibiotiques (2yt ou LB) dans le tube de centrifugation après malaxage à 37 ° C, 200 RPM réanimation pendant 60 minutes.

4.5000 RPM centrifuger pendant une minute pour recueillir les bactéries, laisser environ 100 µl de surnageant et souffler doucement le bloc de suspension lourde et l'appliquer sur un milieu 2yt ou LB contenant l'antibiotique correspondant.

5. Incuber les plaques à l'envers dans un incubateur à 37 ° C pendant la nuit. Si l'opération de criblage des taches bleues et blanches est effectuée, incuber les plaques à 37°c pendant au moins 17h.

Précautions

1. Cellules sensibles clbioconseilFondre sur la glace. Laisser fondre sur la glace pendant environ 5 minutes, ajouter le plasmide dans les 8 minutes suivant la fonte, sinon cela affectera l'efficacité de la conversion.

2. Le plasmide ou les produits de ligation doivent être mélangés en douceur.

3. La conversion de concentrations élevées de plasmides ou de produits de liaison à haute efficacité peut réduire la quantité de bactéries utilisées à la fin de la plaque.