Milieu spécifique pour les cellules E14

Opération stérile:La culture cellulaire doit être effectuée dans un environnement stérile, la stérilisation par irradiation ultraviolette de la table ultra - propre est nécessaire avant utilisation, l'incubateur est nettoyé régulièrement. Les expérimentateurs doivent changer leurs vêtements de travail, leurs couvre - chaussures, porter des masques et des gants.

Stérilisation des équipements:La verrerie, les instruments métalliques, etc. peuvent être stérilisés à la vapeur à haute pression, les produits en plastique peuvent être stérilisés à l'oxyde d'éthylène ou acheter des produits stérilisés.

Sélection des réactifs:Les réactifs tels que le fluide de culture, le sérum, le tampon utilisés doivent être stériles, non contaminés et doivent être testés stérilement avant utilisation. Différentes cellules ont des différences dans les exigences de composition du fluide de culture et le fluide de culture approprié doit être sélectionné par type de cellule.

Conditions de culture:La température de culture appropriée pour la plupart des cellules de mammifères est de 37 ° C et l'écart doit être contrôlé à ± 0,5 ° c. L'incubateur doit maintenir une bonne étanchéité, vérifier régulièrement la concentration et le débit de gaz, et la culture cellulaire nécessite généralement 5% de CO2 pour maintenir le pH du liquide de culture stable. L'humidité à l'intérieur de l'incubateur doit être maintenue à environ 95%.

‌Observations quotidiennes:La morphologie cellulaire, l'état de croissance et les changements de couleur du liquide de culture sont observés quotidiennement au microscope.

Tests réguliers:Les cellules sont régulièrement testées pour la contamination par mycoplasmes, bactéries, champignons, etc.

E14Milieu de culture spécifique aux cellules

Présentation du produit

E14Le milieu de culture cellulaire est constitué deSoigneusement optimisé par l'équipe et testé sur le long terme, ce produit maintientExcellent état de croissance des cellules E14.

Déjà inclus dans ce produit Les différents ingrédients nécessaires à la croissance des cellules E14, sans aucun ajout, peuvent être utilisés directement dans la culture des cellules E14.

Principaux ingrédients du produit

Milieu de base dmem 405ml

Sérum de veau foetal extra 75 mL

Transport et conservation

Transport: placé dans un incubateur contenant des sacs de bio - glace pour le transport à basse température

Méthode de conservation: 2 ℃ ~ 8 ℃, à l'abri de la lumière, 2 mois; ׏

Attention uniquement pour la recherche scientifique.

Certains composants du système de culture sont des substances nocives pour la santé humaine, veuillez ne pas toucher le liquide du système de culture et l'intérieur du récipient avec des résidus de liquide du système de culture avec la peau exposée; La concentration et la nocivité de cette partie de la substance nocive sont faibles, en cas de contact, il suffit de rincer immédiatement à l'eau du robinet.

Récupération

1) préchauffer l'eau dans un bain - Marie thermostatique à 37 ° C;

2) préparer un tube de centrifugation de 15 ml, ajouter 5 ml de milieu contenant 10% de FBS, mettre dans un bain - Marie à 37 ° C et préchauffer;

3) après avoir mis des lunettes, des gants de laine épais, retirez les cellules à réanimer du réservoir d'azote liquide et Transférez - les dès que possible dans un bain - Marie thermostatique à 37 ℃.

Remise en température secoue le réservoir de congélation pour améliorer le taux de remise en température;

4) Les cellules dans le lyophilisateur fondu sont aspirées dans le tube de centrifugation préparé au préalable, après mélange, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min;

5) préparer un flacon de culture t - 25, écrire le nom de la cellule, la date et ajouter 4 ml de milieu;

6) après la fin de la centrifugation, abandonner le surnageant, après avoir remis les cellules en suspension avec 1 ml de milieu, transférer dans la culture de cellules T - 25, mélanger et transférer

Incubation au repos dans un incubateur CO2.

Passage (recommandation de passage cellulaire un passage deux)

1) Le passage peut être effectué lorsque la confluence cellulaire atteint plus de 85%.

2) dans l'armoire de biosécurité, ouvrez l'embouchure du flacon de culture et collectez le milieu de culture à l'intérieur du flacon;

3) après avoir ajouté 3 ml de PBS 1x stérile à l'intérieur du flacon de culture, placez le flacon de culture horizontalement afin que le PBS puisse s'infiltrer dans toute la surface de la surface inférieure du flacon de culture, aspirez le PBS;

4) Ajouter le suc digestif 1ml à l'intérieur de la bouteille, mettre dans un incubateur de CO2 à 37 ℃ et incuber pendant 1 ~ 2MIN après avoir infiltré la surface inférieure;

5) Observez si les cellules deviennent rondes et flottent sous un microscope inversé lorsque l'incubation est terminée, si tout est digéré, ajoutez 2 ml de milieu contenant 10% de FBS directement à l'intérieur du flacon de culture, aspirez la suspension dans un tube à centrifuger de 15 ml;

① préparer un tube de centrifugation stérile de 15 ml, ajouter 2 ml de milieu contenant 10% de FBS;

② inhaler les cellules digérées dans ① pour la neutralisation à l'intérieur du tube de centrifugation (éviter de souffler ③); Ajouter 1 mL au flacon de culture préalablement digéré poursuivre la digestion pendant environ 2 min, tapoter le flacon de culture et environ 95% des cellules sont déprimées.

6) centrifugation à 1000rpm pendant 5min;

7) préparer deux nouveaux flacons de culture t - 25, chacun avec 4 ml de milieu.

8) Une fois la centrifugation terminée, abandonner le surnageant et remettre en suspension les cellules avec 2 ml de milieu, transférer les cellules remises en suspension dans 2 flacons de culture t - 25 de 1 mL chacun;

9) placez le flacon de culture horizontalement et après mélange sous commotion, placez le flacon de culture à 37 ° C dans un incubateur à 5% de CO2 pour la culture.

Lyophilisation (lyophilisation cellulaire recommande de congeler une unité par flacon de t25)

1) ~ 6) Étapes de passage de référence

7) Une fois la centrifugation terminée, le surnageant est abandonné et les cellules sont remises en suspension avec 1 ml de lyophilisat pour précipitation, puis transférées dans un lyophilisateur de 1,8 ml;

8) transférer le tube de congélation dans une boîte de refroidissement programmée remplie d'alcool isopropylique, puis dans un réfrigérateur à - 80 ℃ pendant la nuit pour refroidir;

9) Le deuxième jour, retirez le tube de congélation dans la boîte de refroidissement séquentiel où le refroidissement est terminé et Transférez - le dans le réservoir d'azote liquide dès que possible pour le conserver.

Protéines thrombo - régulatrices porcinesELISA(TM)Kits de réactifs

Kit ELISA de myosine humaine (Myosine)Myosine humaine(Myosine)Kits de réactifs

Lapinprothrombinfragme1+2,F1+2ELISAKitFragments originaux de lapinF1+2(F1+2)Kit de distribution

CLIAKitforAi-TMAnticorps microsomaux thyroïdiens(TM)Anticorps) et

血小板因子4(Facteur de plaquetteIV)Kit de quantification de fluorescence active20Une fois

Molécule d'adhésion cellulaire de porc2, ICAM-2ELISAKitMolécules d'adhésion intercellulaire porcine2(ICAM-2/CD102)Kits de réactifs

Glutamide synthase de rat(GLUL)Kit, nom anglais:Kit ELISA GLUL

Kit d'ELISA d'ierleucine de lapin 8 (IL-8/CXCL8)Interleukine lapin8(IL-8/CXCL8)Kits de réactifs

E. coli(O157:H7)Kits d'acides nucléiques(par PCR-Méthode de sonde fluorescente) 48T

CLIAKitforMIP-1Beta/CCL4(HumanMacrophageInflammatoryProtein-1Beta)ELISAkitProtéines sexuelles macrophages humains1bêta

Virus cosaki HumoralB(Coxsackievirus B)Quantitativela PCRKit d'amplification20Une fois

Elizabeth 5 nuitsLe chien5Hydroxytryptamine

Apolipoprotéines porcinesB(Apo-B) assemblage de kits/Original

Apolipoprotéines porcinesA1(apo-A1)Assemblage du kit/Original

Grossesse porcine (PROG) assemblage de kits/Original

Progestérone porcine (P) assemblage de kits/Original

5 -Récepteur du triphosphate d'Inositol1Anticorps

CyclismeD2Anticorps

IL1R2Rat reconstituéIL1R2 / IL1RB / CD121bLes protéines(Saétiquette) Protéines

GRP94 (gp96) 0.5mgGRP94 (gp96) 94kDaProtéines régulatrices du sucre(Antigènes) et

ANP32APersonnes reconstituéesANP32A / PHAP1Les protéines(Sa & GSTétiquette) Protéines

BLOC1S2 protéine humainePersonnes reconstituéesBLOC1S2 / BLOS2Les protéines(TPS)étiquette) et

Souris protéine PGLYRP1Souris recombinantesPGLYRP1 / PGRP-SLes protéines(Sade

E14Milieu de culture spécifique aux cellulesGRP94 (gp96) 0.5mgGRP94 (gp96) 94kDaProtéines régulatrices du sucre(Antigènes) et

BLOC1S2 protéine humainePersonnes reconstituéesBLOC1S2 / BLOS2Les protéines(TPS)étiquette) et

IL1R2Rat reconstituéIL1R2 / IL1RB / CD121bLes protéines(Saétiquette) Protéines

Souris protéine PGLYRP1Souris recombinantesPGLYRP1 / PGRP-SLes protéines(Saétiquette) et

ANP32APersonnes reconstituéesANP32A / PHAP1Les protéines(Sa & GSTétiquette) Protéines