Genecopoeia (Renewable gene) aux États - Unis fournit des clones d'expression de cibles basés sur l'action des MIRNA * génomiques, couvrant une base de données publique. Le clone d'expression de la cible MIRNA contient la séquence 3 '- utr (c'est - à - dire le site d'action du MIRNA) immédiatement en aval du gène Rapporteur piloté par le promoteur SV40 (luciférase de Firefly). Le deuxième gène Rapporteur, renilla luciferase, peut être utilisé pour surveiller la transfection, exprimer l'efficacité et peut être utilisé comme Ginseng interne.
Caractéristiques du génome humain MIRNA cible expression clone
L'analyse de l'activité de la luciférase de Firefly a permis d'obtenir des résultats sur l'effet régulateur des miarn sur les gènes cibles potentiels. Les ARNm chimériques de la luciférase ORF et de l'utr 3 'formés après la transcription des clones d'expression, s'il existe un miarn spécifique qui peut se lier de manière complémentaire à une séquence de l'utr 3', l'activité de la protéine codée par la luciférase ORF dans la chimère est également régulée en conséquence, de sorte que la détection de l'intensité lumineuse de la luciférase permet de déterminer quantitativement l'effet de la régulation de l'ARNm de la cible correspondante par le miarn.
Application de précurseurs de MIRNA et de clones d'expression de cible
- Régulation de l'expression génique: la régulation de l'expression d'un gène par un seul ou plusieurs miarn est effectuée par transfection ou infection par des particules virales en introduisant un seul ou un ensemble complet de miarn dans des cellules en culture. Etude des conditions spécifiques ou de la somatisation des effets régulateurs et des fonctions des MIRNA
- Confirmation et identification des gènes cibles de MIRNA: criblage et confirmation à grande échelle des gènes cibles d'action de MIRNA utilisant des cibles de MIRNA pour valider les clones d'expression. Un miarn peut agir sur tous les gènes cibles, et peut agir sur un ARNm de 3 '- utr tous les miarn