Ensemble de milieu de culture d'organoïdes de cancer de l'endomètre biologique de moule

Kit d'organoïdes du cancer de l'endomètre humain

Ensemble de milieu de culture organoïde pour le cancer de l'endomètre humain

1, Description du produit

Ensemble de milieu de culture organoïde de cancer de l'endomètre humain de biologie de moule (Kit d'organoïdes du cancer de l'endomètre humain), un milieu de culture cellulaire chimiquement défini pour l'établissement et le maintien des organoïdes du cancer de l'endomètre. Les organoïdes tumoraux d'origine patiente résument les caractéristiques génomiques et pathologiques des tumeurs primitives et sont donc très prometteurs pour la recherche médicale et la médecine de précision.

2, Informations sur le produit

3, Autres matériaux et réactifs autonomes

4, Préparation d'un milieu de culture organoïde pour le cancer de l'endomètre humain

Le milieu de culture organoïde pour le cancer de l'endomètre humain a été formulé en utilisant une technique de manipulation stérile. Voici la formulation10 mlDes exemples de milieux de culture, si la quantité requise est différente, peuvent être ajustés en conséquence.

1, Décongélation sur glace human endometrial cancer organoid culture factorB(50x)Et facteurs de culture d'organoïdes pour le cancer de l'endomètre humainC(250x)- Oui.

Remarque: Après décongélation, il est recommandé de cultiver des facteurs organoïdes pour le cancer de l'endomètre humainB(50x)Et facteurs de culture d'organoïdes pour le cancer de l'endomètre humainC(250x)Conserver l'utilisation après le chargement séparé, éviter la congélation et la dégel répétées

2, Sera200μLFacteurs de culture d'organoïdes pour le cancer de l'endomètre humainB(50x),40μLFacteurs de culture d'organoïdes pour le cancer de l'endomètre humainC(250x)Ajouter à9,76 mlCancer de l'endomètre humain organoïdes culture milieu de base, bien mélangé, formulé en10 mlMilieu de culture organoïde pour le cancer de l'endomètre humain.

Remarque: le milieu de culture organoïde de cancer de l'endomètre humain après formulation peut être utilisé dans2-8°CStockage, recommandé dans les deux semaines. Facteurs de culture d'organoïdes pour le cancer de l'endomètre humainB(50x)Contient des antibiotiques bactériens et fongiques.

5, Culture primaire et de passage des organoïdes du cancer de l'endomètre humain d'origine patiente

Remarque: les études impliquant des matériaux de tissus humains primaires doivent suivre toutes les réglementations institutionnelles et gouvernementales pertinentes. Le consentement éclairé de tous les sujets doit être obtenu avant la collecte des principaux tissus humains.

a) Établissement d'organoïdes de cancer de l'endomètre chez les humains primaires

1, Des fragments de tissu humain primaire de cancer de l'endomètre ont été recueillis dans une solution froide de stockage de tissu primaire à l'aide d'un tube à centrifuger. Garder l'échantillon de tissu à4℃Jusqu'à ce que la séparation commence.

2, Évaluer si les fragments de tissus obtenus sont constitués d'épithélium. Si la graisse ou le tissu musculaire est présent, utilisez un couteau ou une pince à épithélium sous un microscope anatomique pour éliminer autant de ces composants non épithéliaux que possible. S'il n'y a pas de graisse ou de tissu musculaire, passez immédiatement à l'étape suivante.

3, Avec le milieu de base des organoïdes épithéliaux ouDPBSRincez le tissu deux fois.

4, Utilisez un couteau ou Coupez le tissu en1 à 3 mm³ petits morceaux, placés dans une boîte de culture cellulaire.

5, Dans37℃Utilisation inférieure10 mlSolution Digestive de tissu tumoral dans15 mlDigestion de fragments de tissus dans un tube à centrifuger, temps de digestion variable, à partir de30Minutes à1.5Les heures varient. Surveiller attentivement le processus de digestion, peut souffler correctement pour observer le degré de digestion. Lorsque la plupart des fragments de tissus sont capables de passer1 mlLorsque la pipette aspire la tête, le processus de digestion est terminé.

6, SeraFBSAjouter au mélange de digestion tissulaire, la concentration finale étant2%Et utiliser100 μmFiltration des filtres cellulaires.

7, Collecter et dans4°CInférieur à250gCellules filtrées par centrifugation3Minutes. En cas de précipité rouge visible, inhaler le surnageant et utiliser2 mlPrécipité de resuspendation du lysat de globules rouges, lyse des globules rouges à température ambiante1Minutes et dans4°CInférieur à250gCentrifugation3Minutes.

8, Aspirer le surnageant et remettre le précipité en suspension dans le milieu de base, dans4°CInférieur à250gCentrifugation3Minutes, répétez à nouveau.

9, Le surnageant est aspiré et le précipité est remis en suspension dans la colle matricielle. La Colle de matrice doit être conservée sur la glace pour éviter sa coagulation. Faites le processus le plus rapidement possible. La quantité de colle matricielle utilisée dépend de la taille des particules. Environ10，000Les cellules doivent être inoculées dans25 μLDans la colle de matrice.

10, Ne pas trop diluer la colle de matrice (la proportion de colle de matrice doit être> 70%(volume de colle de matrice/Volume total)), car cela peut inhiber la formation correcte de gouttelettes solides. étaler la colle matricielle contenant les organoïdes sur24Fond d'une plaque de culture cellulaire de puits, chaque goutte entourant le Centre du puits environ30μL- Oui.

Remarque: une fois que les organoïdes sont remis en suspension dans la colle matricielle, effectuez la germination dès que possible, car la colle matricielle peut se solidifier dans le tube à essai ou la tête d'aspiration de la pipette. Ne laissez pas les particules de matrice toucher la paroi du tube.

11, Placer la plaque de culture dans37°Cet5 % de CO₂Dans l'incubateur15 à 25Minutes, laissez le gel de matrice se solidifier.

12, Préparer la quantité requise de milieu de culture organoïde pour le cancer de l'endomètre humain.

13, Une fois que les gouttelettes de gel de matrice sont coagulées (15 à 25Minutes), ouvrez la plaque et ajoutez - la soigneusement dans chaque trou500 μLMilieu de culture organoïde pour le cancer de l'endomètre humain. Remarque: n'ajoutez pas le milieu de culture directement sur le dessus des gouttelettes de gomme matricielle, car cela pourrait endommager la structure coagulée.

14, Placer la plaque de culture dans37℃et5 % de CO₂Dans un incubateur à température constante.

15, Chaque fois3 - 4Changez le milieu une fois par jour, aspirez soigneusement le milieu du puits et remplacez - le par un milieu frais et préchauffé d'organoïdes.

16, Surveiller de près l'état de croissance des organoïdes, idéalement, les organoïdes du cancer de l'endomètre humain devraient être7 - 9Construit en jours.

b) Culture générationnelle des organoïdes du cancer de l'endomètre

1, Les organoïdes à gratter sont balayés par soufflage à l'aide d'une tête de pistolet lavée avec une lotion lubrifiante et la suspension d'organoïdes et de milieu de culture est transférée à l'organoïde lavé avec une lotion lubrifiante1,5mLEPDans le tube.

2, La suspension d'organoïdes est fortement remise en suspension avec une tête de pistolet lavée avec une lotion lubrifiante, de sorte que les organoïdes se séparent de la colle matricielle.

3, 250gForce centrifuge centrifugation à température ambiante3 minutes- Oui.

4, Défaussez le nettoyage, utilisez des sucs digestifs organoïdes ou détruisez mécaniquement. Pour la dissociation cellulaire utilisant le digestif organoïde, la suspension d'organoïde est remise en suspension dans le digestif organoïde, la pipette est soufflée à plusieurs reprises de haut en bas et juxtaposée à37°CIncuber jusqu'à dissociation des organoïdes. Utilisation d'une tête de pistolet à cartouche filtrante chaque2Minute soufflage répété vers le haut et vers le bas8Secondaire, pour aider à la dissociation des organoïdes. Une surveillance étroite du processus digestif permet une incubation minimale dans le liquide dissociatif organoïde. En cas de défaillance mécanique, en1,5 mlSuspension d'organoïdes en milieu basal épithélial. Aspirer soigneusement la suspension d'organoïdes avec une pipette, de haut en bas à plusieurs reprises30Une fois, cela aidera à la digestion.

AttentionPour:Ne pas dissocier dans le liquide de dissociation organoïde plus de7Minutes, car cela peut entraîner la croissance ou même la destruction des organoïdes pauvres. Par expérience, si c'est un mélange de petites cellules, on peut observer que10 à 50Une masse de cellules, la digestion est terminée.

5, Une fois la digestion terminée, utilisez1 mlMilieu de base des organoïdes épithéliaux soumis à un rinçage puis à température ambiante250gCentrifugation3Minutes.

6, Abandonner le débridement, resuspendre les organoïdes précipités avec une quantité appropriée de colle matricielle, remettre sur la glace après resuspendation, ne pas dépasser le temps de resuspendation30 ansPour éviter une coagulation prématurée du gel de matrice. Remarque: la proportion de dilution de la colle de matrice doit être70%Ci - dessus pour garantir la stabilité structurelle de la colle matricielle pendant la culture.

7, Spot suspension mixte de colle matricielle et organoïdes dans24Fond de la plaque d'orifice positif, éviter que la suspension touche la paroi latérale de la plaque d'orifice, chaque trou30μLGauche et droite. Remarque: pour éviter que la colle de matrice ne se solidifie à température ambiante, cette étape doit être effectuée dès que possible.

8, Plaque de culture après la fin de l'inoculation quant à37℃Dans un incubateur thermostaté au dioxyde de carbone, incubé15 minutesGauche et droite à gélifier le substrat.

9, Formuler un milieu de culture organoïde pour le cancer de l'endomètre humain.

10, Après gélification du substrat à gélifier, on ajoute le milieu de culture organoïde de cancer de l'endomètre déjà formulé,48Plaque ajoutez par trou250μLMilieu de culture.

11, Sera24Plaque de trou placée37℃Incuber dans un incubateur de dioxyde de carbone jusqu'à ce que les organoïdes nécessitent d'autres expériences.

V2.0Edition

Temps de mise à jour:2025 / 6 / 21