Kit de détection ELISA d'acide myristique pour souris

Kit de détection ELISA d'acide myristique pour souris

Mode d'emploi

Principe de détection

Kit avec test d'immunoadsorption enzymatique en une étape par la méthode sandwich à double anticorps (ELISA).Vers le package préalableêtre肉豆蔻酸（Myristicacide) etLe paquet d'anticorps est microporeux, à son tour ajouté spécimen, standard,Anticorps de détection marqués HRP, incubés et lavés. La couleur est révélée avec le substrat TMB qui se transforme en bleu sous la catalyse de la peroxydase et en jaune final sous l'action de l'acide. Nuances de couleur et dans l'échantillon肉豆蔻酸（Myristicacide) etPrésentéCorrélation positive. Avec un marqueur enzymatique enDétermination de l'Absorbance (valeur OD) à une longueur d'onde de 450 nm, calcul de la concentration de l'échantillon.

Méthodes de collecte, de traitement et de conservation des échantillons

1. Sérum: utilisez un tube à essai sans pyrogène et endotoxine, évitez toute irritation cellulaire pendant l'opération, après la collecte du sang, le sérum et les globules rouges sont rapidement et soigneusement séparés par centrifugation à 3000 tours pendant 10 minutes.

2. Plasma: EDTA, Citrate ou héparine anticoagulant. Centrifuger à 3000 tours pendant 30 minutes.

3. Surnageant cellulaire: 3000 tours de centrifugation pendant 10 minutes pour éliminer les particules et les polymères.

4. Homogénat tissulaire: mélanger les tissus avec la bonne quantité de solution saline physiologique. Centrifuger à 3000 tours pendant 10 minutes pour enlever le limpide.

5. Conservation: si l'échantillon n'est pas détecté à temps après la collecte, s'il vous plaît diviser l'ensemble selon une dose unique, conserver la congélation à - 20 ℃, éviter la congélation et la dégel répétées, décongeler à température ambiante et s'assurer que l'échantillon est uniformément plein et dégelé.

Articles autonomes

1. Marqueur enzymatique (à 450 nm)

2. Échantillonneurs et têtes de pistolet de haute précision:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37 ℃ boîte de température constante

Précautions opérationnelles

1. Le kit est conservé dans2 - 8 ℃, utilisez la température de la Chambre avant pour équilibrer pendant 20 minutes. Le liquide de lavage concentré retiré du réfrigérateur aura une cristallisation, ce qui appartient au phénomène normal, le chauffage du bain - Marie permet de dissoudre la cristallisation et de la réutiliser.

2. Les lattes qui ne sont pas utilisées dans l'expérience doivent être immédiatement remises dans un sac auto - scellé, scellé (séché à basse température) pour la conservation.

3. La concentration estLe critère s0 de 0 peut être considéré comme un contrôle négatif ou vide; En suivant les instructions, l'échantillon a été dilué 5 fois et le résultat final multiplié par 5 est la concentration réelle de l'échantillon.

4. Les opérations d'incubation sont effectuées strictement selon le temps, la quantité de liquide et l'ordre indiqués dans les instructions.

5. Bien agiter tous les composants liquides avant utilisation.

Composition du kit

Note: standard (S0 - S5) concentration dans l'ordrePour:050、100、200、400Et,800 pg/mL

Préparation des réactifs

Dilution du tampon de lavage 20x: l'eau distillée est diluée à 1: 20, soit 1 partie de tampon de lavage 20x plus 19 parties d'eau distillée.

Méthode de lavage de plaques

1. Plaque de lavage à la main: vider le liquide à l'intérieur des trous, remplir chaque trou avec du liquide de lavage, laisser reposerVider le liquide à l'intérieur du trou après 1 min, sécher sur du papier absorbant et laver la plaque 5 fois.

2. Laveuse automatique de plaques: injection de lotion par trou350μL， Laisser infuser 1 min et laver la plaque 5 fois.

étapes de fonctionnement

1. Équilibré à partir de la température ambianteRetirez les lamelles nécessaires dans le sac de papier d'aluminium après 20min, les lamelles restantes sont remises à 4 ° C scellées avec un sac auto - scellé.

2. Mettre en place des trous standard et des trous d'échantillon, trous standard chacun plus différentes concentrations de standard50 μL;

3. Trou d'échantillon ajouter d'abord l'échantillon à mesurer10μL， Ajouter une dilution supplémentaire de 40 µl; Les trous vides ne sont pas ajoutés.

4. Ajout de peroxydase de raifort par puits dans les puits standard et les puits d'échantillon, à l'exception des puits vides (HRP) marqué anticorps de détection 100 µl, les puits réactionnels sont scellés avec une membrane de plaque de scellement et incubés à 37 ° C dans un bain - Marie ou un incubateur pendant 60 min.

5. Jeter le liquide, sécher sur papier absorbant, remplir chaque trou avec du liquide de lavage, laisser reposer1min， Jeter le liquide de lavage, tamponner le papier absorbant à sec, ainsi répéter le lavage de la plaque 5 fois (également disponible pour laver la plaque à la machine).

6. Ajouter le substrat par trouA, B 50 µl chacun, 37 ℃ incuber à l'abri de la lumière pendant 15 min.

7. Ajouter le liquide de terminaison par puitsLa valeur de do de chaque puits a été déterminée à une longueur d'onde de 450 nm pendant 50 µl, 15 min.

Jugement des résultats

Dessiner une courbe Standard: dansDans une feuille de calcul Excel, en abscisse pour la concentration standard et en ordonnée pour la valeur od correspondante, une courbe de régression linéaire standard est tracée et les valeurs de concentration de chaque échantillon sont calculées par équation de courbe.
Kit de détection ELISA d'acide myristique pour souris