Fonctionnement du kit de détection ELISA pour la protéine codanin1 (cdan1) de poisson zèbre

Fonctionnement du kit de détection ELISA pour la protéine codanin1 (cdan1) de poisson zèbreRésumé des instructions d'utilisation standard pour référence. Les étapes spécifiques sont soumises aux instructions réelles du kit.

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I. préparation avant l'expérimentation

1. Réactifs et matériaux

   • Kits (contenant des étalons, des anticorps de détection, des plaques de marquage enzymatique, des substrats A / B, des liquides de terminaison, des liquides de lavage, des membranes de scellement, etc.
   • Échantillons (sérum, plasma, homogénat de tissus, etc.).
   • Incubateur 37 ℃, centrifugeuse, pipette, Laveuse de plaques (ou laveuse manuelle de plaques), étalon enzymatique (longueur d'onde de 450 nm).

2. Traitement des échantillons

   • Sérum / plasma: séparation par centrifugation (3000 x G, 10 min), prélèvement du surnageant.
   • Homogénat tissulaire: après centrifugation de l'homogénat (5000 × G, 10 min), on prélève.
   • Les échantillons doivent éviter la congélation et la dégel répétées, la conservation à court terme à 4 ℃ ou la conservation à long terme à - 80 ℃.

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II. Étapes opérationnelles

1. Formulation de produits standard

• La poudre lyophilisée standard est redissoute avec une dilution, diluée selon un gradient d'instruction.

2. Échantillonnage

• Ajoutez 100 μl d'échantillon ou d'étalon par puits, en laissant des trous vides.
• Couvrir la membrane de scellement et incuber à 37 ° C pendant 90 minutes.

3. Lavage

• Défaussez le liquide à l'intérieur des puits, ajoutez 350 µl de liquide de lavage par puits, laissez - le pendant 30 secondes et répétez 3 fois. Tapoter le liquide résiduel sec.

4. Détection de l'incubation des anticorps

• 100 µl de liquide de travail d'anticorps biotinylé sont ajoutés par puits et incubés à 37°c pendant 60 minutes.
• Lavage 3 fois (arrêt synchrone 3).

5. Réactions de rendu des couleurs

• 100 µl de conjugué enzymatique (marqueur HRP) sont ajoutés par puits et incubés à 37°c pendant 30 minutes à l'abri de la lumière.
• Laver 5 fois (Chedi élimine le liquide de lavage).

6. Terminer la réaction et la lecture

• On ajoute 50 µl de liquide de terminaison par puits et on détermine la do à la longueur d'onde de 450 nm avec un étalon enzymatique en 15 minutes.

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Iii. Calcul des résultats

1. Dessiner une courbe standard
   • Ajustez la courbe standard (modèle à quatre paramètres Logistic couramment utilisé) avec la concentration du standard en abscisse et la valeur od en ordonnée.
2. Calcul de la concentration de l'échantillon
   • La concentration de lpa est calculée en substituant la valeur od de l'échantillon à la formule de la courbe standard.

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Iv. Précautions

1. Évitez strictement la contamination croisée et remplacez la tête du pistolet lors de l'échantillonnage.
2. L'étape de lavage nécessite Chedi pour éviter que les résidus affectent le signal.
3. Les normes et les réactifs doivent être ramenés à température ambiante avant d'être utilisés.
4. Le liquide de terminaison est corrosif et des gants sont nécessaires pour son fonctionnement.
5. Si la valeur od dépasse la plage de courbes standard, vous devez ajuster la proportion de dilution de l'échantillon.

Fonctionnement du kit de détection ELISA pour la protéine codanin1 (cdan1) de poisson zèbre
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