Kit PCR quantitative fluorescente par colorant pour Circovirus porcin de type 1

Circovirus porcinKit PCR quantitatif Fluorescent par colorant de type 1
Circovirus porcin 1 (PCV-1)

Produits et caractéristiques:
Kit PCR quantitative fluorescente par colorant pour Circovirus porcin de type 1Avec les caractéristiques suivantes:

1. Prêt à l'emploi, l'utilisateur doit seulement fournir un échantillon de virus.

2. Amorce monolithique spécialisée conçue selon la séquence conservatrice de la méthode des colorants du Circovirus porcin de type 1, sans réaction croisée avec les virus apparentés.

3. La sensibilité peut atteindre plusieurs centaines de copies / réactions.

4. Détection PCR quantitative par fluorescence à tube unique pour éviter la contamination ultérieure.

5. Ce kit est suffisant pour 50 PCR quantitatives fluorescentes de 20 μl de système réactionnel.

6. Ce produit convient uniquement à la recherche scientifique et ne peut pas être utilisé pour le diagnostic clinique.

Transport et conservationPour: Transport à basse température,- 20 ℃ conservation, valable un an- Oui.

Réactifs autonomesPour: Modèle d'ADN, 10 × Rox (selon la décision de modèle, voir spécifiquement la méthode d'utilisation).

mode d'emploi Un,DilutionContrôle PCR positif(avec10e2 - 10e7 copies / μl ces 6 dilutions 10x sont des exemples)

Remarque: en raison de la très forte concentration de la norme, les opérations de dilution suivantes doivent être effectuées dans une zone indépendante et ne doivent pas contaminer l'échantillon ou d'autres composants de ce kit. Afin d'augmenter la stabilité du produit et d'éviter la propagation d'agents infectieux, ce produit ne fournit pas d'échantillons vivants pour un contrôle positif, mais uniquement des fragments d'ADN qui peuvent être utilisés directement comme contrôle positif.

2. Marquer 6 tubes centrifuges, 7, 6, 5, 4, 3, 2.

3. Ajouter 45 μl de dilution de pochoir spéciale PCR fluorescente séparément avec la tête de pistolet à noyau (de préférence avec la tête de pistolet à noyau, la même chose).

Ajouter 5 μl 1 × 10e8 copies / μl de contrôle positif dans le tube 7, bien commotionner pendant 1 minute, obtenir 1 × 10e8 copies / μl de contrôle positif. Mettez de la glace à utiliser.

Changez la tête du pistolet, dans le tube n ° 6 ajouter 5 μl 1 × 10e7 copies / μl de contrôle positif (résultant de la dilution de l'étape supérieure), bien commotionner pendant 1 minute, obtenir 1 × 10e7 copies / μl de contrôle positif. Mettez de la glace à utiliser.

Changer la tête du pistolet, ajouter 5 μl 1 × 10e6 copies / μl de contrôle positif dans le tube 5, bien commotionner pendant 1 minute, obtenir 1 × 10e6 copies / μl de contrôle positif. Mettez de la glace à utiliser.

7. Répétez l'opération ci - dessus jusqu'à ce que vous obteniez 6 dilutions de contrôles positifs. Mettez de la glace à utiliser.

II. ÉchantillonsPréparation de l'ADNPour:

8. S'il y a n échantillons, N + 2 extractions doivent être définies, un de plus est un PC (contrôle positif de la préparation de l'échantillon),

Une estNC (témoin négatif pour la préparation de l'échantillon). Il est possible d'utiliser 10 µl du témoin PCR positif préparé à l'étape précédente n°4 (concentration de 1 x 10 E4 copies / µl, 10 µl correspondent à 10 000 copies) ou N°5 (concentration de 1 x 10 E4 copies / µl, 10 µl correspondent à 100 000 copies) additionnés d'une quantité d'eau telle que le volume total soit le même que celui demandé pour chaque préparation, comme PC. De l'eau supplémentaire est utilisée comme NC. Si 200 µl d'échantillon sont nécessaires pour chaque préparation, les volumes de PC et de NC doivent également être de 200 µl.

9. Purification de l'échantillon par la méthode auto - sélectionnéeDNA， Ce kit est compatible avec la plupart des kits d'ADN viral sur le marché. Il est également possible d'acheter dnaout, le virus à tube unique de la société, ou dnaout, sa version améliorée. Ce kit est offert gratuitement 15 fois un tube virus dnaout- Oui.

Iii. ParamètresRéaction QPCR (système de 20 µl, réalisée dans la Chambre de préparation de l'échantillon):

10. Si seulement fait1 répétition, puis marquer n + 9 tubes PCR avec n + 2 pour les n + 2 obtenus à l'étape précédente

Les échantillons,1 pour les contrôles PCR négatifs et 6 pour les contrôles PCR positifs. Si vous faites 2 - 3 répétitions, le nombre de réglages de réaction augmente de 2 ou 3 fois en conséquence.

11. Ajouter les ingrédients en appuyant sur le tableau dans le tube marqueur (ce tableau ne répertorie qu'une seule répétition. Le tube échantillon et le témoin négatif sont configurés avant que le témoin positif ne soit configuré et que l'échantillon témoin positif attende que tous les tubes soient stockés avec le couvercle sur le couvercle):

Note: seuls les instruments abi7500, 7700 et 7900 nécessitent l'utilisation de Rox comme témoin, d'autres instruments PCR fluorescents (tels que iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 Et lightcycler480) n'ont pas besoin d'utiliser Rox, alors remplacez par de l'eau.

12. Après avoir couvert le couvercle, PCR selon les paramètres ci - dessous (les paramètres PCR spécifiques peuvent être optimisés par vous - même en fonction de l'instrument différent).

13. Collecte de données

Les opérations spécifiques sont effectuées selon le processus recommandé pour l'instrument utilisé. Les colorants fluorescents contenus dans ce produit ne sont pas combinésLe spectre d'absorption maximal est de 471 nm pour l'ADN, de 500 nm pour l'ADN combiné et de 530 nm pour l'émission maximale. L'acquisition du signal peut être réglée à l'étape de réplication ou d'élongation.

Iv. Traitement des données:

14. Si ce kit est utilisé pour le test quantitatif, la courbe standard est tracée avec la valeur log de la concentration de contrôle positive comme axe horizontal et la valeur CT comme axe longitudinal. La valeur ct de l'échantillon à mesurer est extrapolée à partir de la courbe standard à la valeur log de la concentration d'ADN de l'échantillon, puis à sa concentration.

15. Si cette trousse est utilisée pour des tests qualitatifs et que seuls les résultats positifs ou négatifs sont jugés, le contrôle négatif CT doit être supérieur ou égal à 40. Les contrôles positifs doivent avoir une croissance logarithmique de fluorescence, une courbe d'amplification typique et une valeur de CT inférieure ou égale à 30. L'échantillon à tester est négatif si son ct est supérieur ou égal à 40 et positif s'il est inférieur ou égal à 35. Si c'est entre 35 et 40, répétez une fois. La valeur ct de l'expérience répétée est négative si elle est supérieure ou égale à 40 et positive si elle est inférieure à 40.

À des fins scientifiques seulement, il ne doit pas être utilisé pour l'examen clinique et l'utilisation thérapeutique.