RiboNAT™ Kit de détection rapide et stérile

RiboNAT ™ Kit de détection rapide et stérile

Dans le test d'innocuité des médicaments injectables, la méthode de test de stérilité prescrite par la pharmacopée multinationale nécessite une incubation d'au moins 14 jours. Cependant, certaines thérapies cellulaires doivent être perfusées aux patients dans les jours suivant la production, ce qui rend difficile la réalisation de tests aseptiques avant l’administration, ce qui entraîne également une demande croissante de méthodes de test aseptiques qui fournissent des résultats plus rapidement pour améliorer la sécurité des patients.

RiboNAT ™ Est un kit de test rapide et stérile utilisant la technologie de détection par amplification d'acides nucléiques (NAT), capable de réaliser des tests en seulement 7 heures, ce qui réduit considérablement le temps de détection par rapport aux méthodes traditionnelles. Contrairement aux tests Nat traditionnels qui ciblent uniquement l'ADN génomique des micro - organismes, RiboNAT ™ C'est l'ARN ribosomique (arnr) qui est détecté. Cela rend la détection plus sensible en raison de la forte teneur en arnr dans les micro - organismes. Dans le même temps, les méthodes traditionnelles sont sujettes à de faux positifs en raison de l'ADN résiduel de bactéries mortes ou de l'ADN contaminé dans l'environnement et les matériaux, et ribonat ™ Réduit efficacement ce problème et améliore la précision de la détection.

◆ caractéristiques

● Les résultats sont disponibles le jour de la détection (environ 7 heures)

● détection par PCR inverse en temps réel à l'arnr (RT - RT PCR) avec une sensibilité (9 UFC / ML) supérieure à celle du test d'adng

● réduit les faux positifs causés par les bactéries mortes et l'ADN résiduel

● Une seule fois peut détecter plusieurs bactéries (aérobies et anaérobies) et champignons en même temps

◆ processus expérimental

◆ spécifications du kit de détection

◆ composition du kit

◆ détection de sensibilité

Figure 1. Sensibilité de détection

Une suspension microbienne à la concentration de 9 UFC / ML a été préparée pour les six microorganismes spécifiés dans la pharmacopée. Avec ribonat ™ L'ARN est extrait de ces suspensions et l'ARN ribosomique (arnr) est détecté. L'arnr de tous les microorganismes a été détecté avec succès et les valeurs de CT étaient toutes inférieures à 35.

Figure 2. Sensibilité de détection dans les échantillons de suspension cellulaire

Pour les six microorganismes spécifiés dans la pharmacopée, on a préparé une suspension microbienne à la concentration de 9 UFC / ML et on l'a associée à 0,25 × 10⁶ Mélange de cellules hek293 de cellules / ML. Avec ribonat ™ L'ARN est extrait de la suspension mixte et l'arnr est détecté. L'arnr de tous les microorganismes a été détecté avec succès et les valeurs de CT étaient toutes inférieures à 35.

De plus, les 6 souches ont également été détectées dans les conditions suivantes (données non présentées):

· cellules souches mésenchymateuses (CSM): 0,5 × 10⁶cellules/mL

Cellule T : 1,0 x 10⁶cellules/mL

◆ méthode de détection avec une sensibilité plus élevée

■ concentration bactérienne: 2 UFC / ml

■ temps d'incubation: 3 ~ 15 h

Figure 3. Méthode de détection plus sensible

Contre Aspergillus brasiliensis, Clostridium sporogenes et cutibacterium acnes, des concentrations de:2 UCFSuspension microbienne. Bien que ribonat ™ La durée d'incubation prescrite par le processus opératoire habituel est de 3 heures, mais cette expérience retarde l'incubation à 3 - 15 heures. Après la fin de l'incubation, ribonat est utilisé ™ L'ARN est extrait et l'arnr est détecté. Les résultats ont montré que les trois souches, y compris les bactéries anaérobies strictes (Clostridium sporogenes) et les bactéries à croissance lente (Propionibacterium acnes), ont été détectées avec succès après 14 heures ou plus d'incubation et que les valeurs de CT étaient toutes inférieures à 35.

◆ réduire les faux positifs

RiboNAT ™ L'inclusion d'un réactif d'inactivation de l'ADN bactérien ainsi que d'une étape de traitement DNase réduit efficacement le risque de faux positifs causés par l'ADN résiduel dans l'échantillon.

Figure 4. Réduction des faux positifs

La détection bactérienne des acides nucléiques (NAT) est effectuée en utilisant du PBS stérile commercialisé comme échantillon d'essai. L'une des séries d'expériences (ci - dessus) a extrait l'ADN à l'aide d'un kit disponible dans le commerce, suivi d'une détection PCR quantitative par fluorescence en temps réel ciblée bactérienne. Un autre ensemble d'expériences (ci - dessous) avec ribonat ™ L'ARN a été extrait, suivi d'une détection PCR quantitative par rétrofluorescence en temps réel. Six courbes d'amplification ont été observées dans la méthode basée sur l'ADN, tandis que ribonat a été utilisé ™ Aucun signal amplifié n'a été détecté.

◆ liste des produits