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SW 1990 milieu spécifique aux cellules (L15)

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Vue d'ensemble

Produits associés à SW 1990 cell specific Medium (L15): cellules épithéliales bronchiques humaines cellules épithéliales oesophagiennes primaires humaines Jar 160; Cellules de fibrome oesophagien primaire humain milieu spécial cellules de fibrome oesophagien primaire humain U - 2 os cellules d'ostéosarcome humain milieu spécial cellules primaires de Muller rétinien humain milieu spécial cellules colorées épithéliales rétiniennes primaires humaines NCI - h3122 cellules humaines de cancer du poumon non à petites cellules milieu spécial cellules endothéliales microvasculaires rétiniennes primaires humaines

Détails du produit

Propriétés du produit:

Nom du produit

spécification

Forme du produit

SW 1990 milieu spécifique aux cellules (L15)

125 ml × 4

liquide

Présentation détaillée des marchandises:

Soigneusement optimisé par l'équipe technique et testé sur le long terme, ce produit maintientL'état optimal de croissance des cellules SW 1990. Les différents ingrédients nécessaires à la croissance des cellules SW 1990 sont déjà inclus dans ce produit, sans ajout d'ingrédients, et peuvent être utilisés directement dans la culture in vitro des cellules SW 1990. Ce produit est destiné à une utilisation scientifique ultérieure et ne doit pas être utilisé à des fins diagnostiques, thérapeutiques, cliniques, domestiques ou autres.

Description du produit

Forme du produit: liquide

Concentration du produit: 1 ×

Spécifications du produit: 125mL × 4

Ingrédients du milieu de culture: L-15 de Leibovitz + 10% FBS + 1% P/S

Détection des bactéries: négatif

Détection de champignons: négatif

Détection de mycoplasmes: négatif

Expériences de croissance cellulaire: bonne croissance cellulaire, morphologie normale

Teneur en endotoxines(UE/mL): ≤3

Conditions de stockage: 2 ~ 8 ℃, stockage à l'abri de la lumière

Conditions de transport: transport réfrigéré en sacs de glace

Durée de validité: 3 mois

1.png

Rapport expérimental:

I. séparation et culture:

II. Identification par immunofluorescence:


1, dans des conditions aseptiques, retirer le tissu auriculaire de rat SD d'âge 1 - 3D, puis laver ce bloc de tissu avec du PBS 2 fois, et finalement sera d'environ 1 mm 3;
Ajouter 4 ml de digestat enzymatique (0,1% et 0,1% collagénase de type I) dans le bloc de tissu, suspendre pendant 10 s, mettre à 37 ℃ pour la digestion pendant 10 min, après quoi souffler avec un compte - gouttes pour faire une suspension unicellulaire, précipiter naturellement et recueillir le surnageant, mettre 4 ℃ après la fin de la digestion avec un milieu contenant 10% de FBS;
3, le tissu restant est ajouté 3 ~ 4 ml de digestat enzymatique, suspendu pendant 10 s, après la digestion à 37 ℃ pendant 10 min, selon la méthode ci - dessus pour recueillir le surnageant et terminer la digestion après 4 ℃ placer, répétez cette étape 2 - 3 fois jusqu'à ce que le tissu soit digéré;
4, filtrer le digestat cellulaire avec un tamis en acier inoxydable de 200 Mesh, centrifuger à 1200r / min pendant 10 min, éliminer le surnageant, les cellules précipitées sont suspendues avec du milieu contenant 10% de FBS dmem / F12, ensemencées dans des flacons de culture de 25 cm 2, placés à 37 ° C, incubés Dans un incubateur à 5% de CO2;
5, après l'application différentielle de la paroi 1H, le milieu de culture est aspiré et la culture continue comme l'expérience nécessite l'ensemencement dans une plaque de 6 puits;

1, à la croissance des myocytes auriculaires à 80% de fusion, le milieu de culture est abandonné et les cellules sont rincées 2 fois avec du PBS incubé pendant 10 min, puis les cellules sont fixées avec du paraformaldéhyde à 4% pendant 15 min à température ambiante;
2, PBS rincer les cellules 2 fois pendant 10 min, puis à 4 ° c Avec 0,1% Triton X - 100 perméable pendant 15 min;
3, PBS rincer les cellules 2 fois, chaque fois pendant 10 min, puis dans des conditions de température ambiante, fermer les cellules avec BSA 4% pendant 30 min;
4, diluer alpha - Actin un anti dans un rapport de 1: 100, puis placez - le dans un réfrigérateur à 4 ° C pour incuber les cellules pendant la nuit;
5, PBS rincer les cellules 3 fois, chaque fois pendant 10 min, diluer le bis - anti - alpha - actine dans un rapport de 1: 150, 37 ℃ condition de laisser 1 h;
6, rincer 3 fois avec du PBS pendant 10 min, et enfin observer l'image sous un microscope à fluorescence inversé et prendre des photos.

Discipline opérationnelle:
Préparation du milieu de culture et des conditions de congélation:
1) Préparation du milieu rpmi - 1640, 90%; Sérum de veau foetal de haute qualité, 10%.
2) conditions de culture: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%. Température: 37 ℃, l'humidité de l'incubateur est de 70% - 80%.
3) lyophilisat: 90% sérum, 10% DMSO, maintenant utilisé avec le dosage actuel, stockage d'azote liquide.
II. Traitement cellulaire:
1) réanimer les cellules: Placez rapidement le lyophilisateur contenant 1 ml de suspension cellulaire dans un bain - Marie à 37 ° C (la surface de l'eau doit être inférieure au couvercle du lyophilisateur) secouez et décongelez, déplacez - le dans un tube à centrifuger de 15 ml préparé au préalable contenant 4 ml de milieu de culture et mélangez bien. Centrifuger 4 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite transférées pour culture dans des flacons de culture contenant 5 ml de milieu pendant une nuit. Changez de liquide le lendemain et vérifiez la densité cellulaire.
2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.
Pour les cellules en suspension, le passage peut se référer aux méthodes suivantes:
Méthode 1: collecter les cellules,1000RPM, Centrifuger à température normale pendant 5 minutes, éliminer le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de la solution de culture après soufflage et distribuer la suspension cellulaire dans de nouvelles boîtes contenant 8 ml de milieu de culture ou des flacons dans un rapport de 1: 2 à 1: 5.
Produits de la société pour la recherche scientifique uniquement

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