Introduction aux kits de détection spectrophotométriquePour:
La PDC se trouve principalement dans la levure et est l'une des enzymes clés de la fermentation de l'éthanol qui catalyse la Décarboxylation du pyruvate pour produire de l'acétaldéhyde.
Principe de détermination:
La PDC catalyse la Décarboxylation du pyruvate en acétaldéhyde et l'ajout d'éthanol déshydrogénase (ADH) pour catalyser davantage la réduction de l'acétaldéhyde par le NADH en éthanol et NAD +; Le NADH a un pic d'absorption à 340 nm alors que le NAD + n'en a pas; L'activité PDC a été calculée en déterminant la vitesse de chute de l'absorption lumineuse à 340 nm.
Instruments et fournitures propres:
Mortier, glace, centrifugeuse de table, Spectrophotomètre UV, colorimètre à quartz de 1 ml, pistolet à pipette réglable et double vapeur d'eau.
Composition et formulation de l'agent:
Extrait: liquide 100 ml x 1 flacon, conservé à 4°C.
Réactif I: liquide 20 ml x 1 flacon, conservé à 4°C.
Réactif II: poudre × 1 flacon, 4 ℃ conservé à l'abri de la lumière. Dissoudre avec 1 mL d'eau distillée avant utilisation provisoire; Après le fractionnement avec des réactifs incomplets - 20 ° C de conservation, interdit la congélation et la dégel répétées.
Réactif III: poudre × 1 flacon, 4 ℃ conservé à l'abri de la lumière. Dissoudre avec 1 mL d'eau distillée avant utilisation provisoire; Après le fractionnement avec des réactifs incomplets - 20 ° C de conservation, interdit la congélation et la dégel répétées.
Réactif IV: poudre × 1 flacon, 4 ℃ conservé à l'abri de la lumière. Dissoudre avec 1 mL d'eau distillée avant utilisation provisoire; Après le fractionnement avec des réactifs incomplets - 20 ° C de conservation, interdit la congélation et la dégel répétées.
Tableau des opérations de détermination:
Formule de calcul de l'activité enzymatique:
A. la formule de calcul, déterminée à l'aide d'une cuvette de mesure de quartz à l'état de traces, est la suivante:
(1) calculé par la concentration protéique de l'échantillon:
Définition de l'activité enzymatique: la quantité d'enzyme nécessaire pour produire catalytiquement 1 nmol de H2O2 par milligramme de protéine tissulaire par minute à pH 7,2 et à une température de 37 °C est d'une unité de viabilité enzymatique (u).
Activité Dao (nmol / MIN / mg prot) = × V anti - total ÷ (V - like × CPR) ÷ t = 18 × a460 ÷ CPR
(2) calculé par la masse de l'échantillon:
Définition de l'activité enzymatique: la quantité d'enzyme nécessaire pour produire catalytiquement 1 nmol de H2O2 par gramme de tissu et par minute à pH 7,2 et à une température de 37 °C est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Activité Dao (nmol / MIN / g poids frais) = × V anti - total ÷ (V - like ÷ V - like total × w) ÷ t = 18 × a460 ÷ W
(3) par nombre de cellules:
Définition de l'activité enzymatique: la quantité d'enzyme nécessaire pour produire catalytiquement 1 nmol de H2O2 par minute pour 104 cellules à pH 7,2 et à une température de 37 °C est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Activité Dao (nmol / MIN / 104 Cell) = × V anti - total ÷ (V - like ÷ V - like total × nombre de cellules) ÷ t = 18 × a460 ÷ nombre de cellules
(4) calculé en volume de liquide
Définition de l'activité enzymatique: la quantité d'enzyme nécessaire à la production catalytique de 1 nmol de H2O2 par minute et par ml de sérum à pH 7,2 et à une température de 37 °C est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Activité Dao (nmol / MIN / ML) = × V anti - total ÷ V - like ÷ t = 18 × a460
ε: coefficient d'extinction millimolaire de l'orthoanilamine oxydée: 7,5 L / mmol / cm; D: diamètre spécifique de la boîte de couleur, 1 cm; v total inverse: volume total de la réaction, 0,2 ml; v - échantillon: volume de l'échantillon dans la réaction, 0,05 ml; v - échantillon total: volume du liquide d'extraction ajouté, 1 mL; CPR: concentration de la protéine de l'échantillon, mg/mL; W: masse de l'échantillon, G; t: temps de réaction, 30 min
B. La formule de calcul déterminée avec une plaque de 96 puits est la suivante:
(1) calculé par la concentration protéique de l'échantillon:
Définition de l'activité enzymatique: la quantité d'enzyme nécessaire pour produire catalytiquement 1 nmol de H2O2 par milligramme de protéine tissulaire par minute à pH 7,2 et à une température de 37 °C est d'une unité de viabilité enzymatique (u).
Activité Dao (nmol / MIN / mg prot) = × V anti - total ÷ (V - like × CPR) ÷ t = 36 × a460 ÷ CPR
(2) calculé par la masse de l'échantillon:
Définition de l'activité enzymatique: la quantité d'enzyme nécessaire pour produire catalytiquement 1 nmol de H2O2 par gramme de tissu et par minute à pH 7,2 et à une température de 37 °C est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Activité Dao (nmol / MIN / g poids frais) = × V anti - total ÷ (V - like ÷ V - like total × w) ÷ t = 36 × a460 ÷ W
(3) par nombre de cellules:
Définition de l'activité enzymatique: la quantité d'enzyme nécessaire pour produire catalytiquement 1 nmol de H2O2 par minute pour 104 cellules à pH 7,2 et à une température de 37 °C est définie comme une unité de viabilité enzymatique.
Anticorps apolipoprotéine L5, anticorps déméthylase 1 spécifique de l'Histone lysine
Anticorps Apolipoprotéine M, anticorps Histone lysine déméthylase phf8
Anticorps Apolipoprotéine O, anticorps Histone lysine n - méthylezh1
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Pyruvate décarboxylase (PDC) UV spectrophotométrie test cassette colonne bactérienne rnaout50 fois colonne logicielle rnaout50 fois
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