T0P10感受态细胞*

T0p10 cellules sensibles *
Nom du produit: * 0 Chemically Competent Cell
Numéro d'article du produit: g6015 - 20 (20 PCS 100ul), g6015 - 100 (100 Pcs 100ul)
Spécifications / Introduction: g6015 - 20 (20pcs 100ul), g6015 - 100 (100pcs 100ul)

gèneType

F-mcrA△(mrr-hsdRMS--mcrBC) φ80 lacZ△M15△lacX74 recAl ara△139△(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

Brève descriptionPour:

La souche t0p10, dérivée de la souche mc1061, est l'une des cellules réceptrices actuellement utilisées en laboratoire et a un génotype très similaire à celui de dh10b (dh10b est de type gale15, tandis que t0p10 est de type galu). La croissance de clbio * 0 est rapide (plus rapide que celle de DH5a mais plus lente que celle de mach1 - T1), 10 heures de clonage visible, les mutations de reca1 et enda1 favorisent la stabilisation de l'ADN inséré et l'extraction d'ADN plasmidique de haute pureté. Peut être utilisé pour construire des clones, des expériences telles que le criblage des taches bleues et blanches, avec résistance en chaîne * *. Les cellules sensibles t0p10 de la série clbio ont été fabriquées par un procédé spécial avec une efficacité de transformation > 108 UFC / µg détectée par le plasmide pUC19.

Instructions de fonctionnement:

1.clbio * 0 cellules réceptrices placer dans la glace pour fondre (ou laisser aller le cœur ou la température ambiante pendant un moment, insérer rapidement dans la glace lorsque la bactérie est dans un état de mélange d'eau glacée), ajouter l'ADN d'intérêt (plasmide ou produit de liaison) et mélanger doucement avec la main sur le fond du tube EP, laisser reposer sur la glace pendant 25 minutes.

2,42 ° C bain d'eau chaud pendant 45 secondes, remettre rapidement sur la glace et laisser reposer pendant 2 minutes, l'agitation réduira l'efficacité de la conversion.

3. Ajouter 700 μ1 de milieu stérile 2yt ou LB sans antibiotiques dans le tube de centrifugation, 37 ° c Après malaxage, 200 RPM de réanimation pendant 60 minutes.

4.5000rpm centrifuger pendant une minute pour recueillir les bactéries, laisser environ 100 μ1 de surnageant et souffler doucement le bloc de suspension lourde et l'appliquer sur un milieu 2yt ou LB contenant l'antibiotique correspondant.

5. Incuber les plaques à l'envers dans un incubateur à 37 ° C pendant la nuit. Si vous effectuez une opération de dépistage des taches bleues et blanches, placez la plaque à 37 ° C pour incuber pendant au moins 13h.

PrécautionsPour:

1.clbio cellules sensibles fondent sur la glace. Laisser fondre sur la glace pendant environ 5 minutes, ajouter le plasmide dans les 8 minutes suivant la fonte, sinon cela affectera l'efficacité de la conversion.

2. Le plasmide ou les produits de ligation doivent être mélangés en douceur.

3. La conversion de concentrations élevées de plasmides ou de produits de liaison à haute efficacité peut réduire la quantité de bactéries utilisées à la fin de la plaque.

T0p10 cellules sensibles *