Tk10 (cellules cancéreuses du rein humain)

Tk10 (human kidney cancer cell) est une cellule épithéliale dont le tissu est dérivé du rein et dont la morphologie cellulaire se présente comme suit: cellules épithéliales similaires, conditions de culture: rpmi - 1640, 95%; FBS，5%。

II. Traitement après réception cellulaire

1) après avoir reçu les cellules, la paroi de la bouteille de désinfection de l'alcool à 75% place la bouteille t25 à la température ambiante pendant environ 1h, si vous trouvez que la bouteille de culture est cassée, qu'il y a un déversement de liquide et que les cellules sont contaminées, veuillez nous contacter rapidement après avoir pris des photos.

2) s'il vous plaît confirmer l'état des cellules sous un microscope 4 ou 5X, tout en prenant des photos des cellules fraîchement reçues (10 ×, 20 ×) 2 - 3 de chaque ainsi qu'une photo de l'apparence du flacon de culture à retenir comme base de l'état des cellules au moment de la réception Après - vente.

3) Cellules d'accrochage: les cellules sont placées à la température ambiante pendant 1H, la croissance des cellules et l'accrochage sont observés sous un microscope, certaines cellules d'accrochage tomberont en raison des vibrations pendant l'expédition Express et la formation de masse après la chute. Si la densité de croissance des cellules observées sous miroir est inférieure à 60%, le milieu de perfusion peut être retiré du flacon de culture (s'il y a des cellules non collées qui doivent être récupérées par centrifugation, remises en suspension dans le flacon de culture d'origine), ajouter le milieu de culture complet nouvellement formulé 6 - 8 ML, mettre dans l'incubateur de cellules pour poursuivre la culture. Si la densité de croissance cellulaire est supérieure à 70% - 80%, les cellules peuvent être traitées par passage. Pendant le passage, si les cellules tombées en raison des vibrations de transport doivent être récupérées par centrifugation.

4) Méthode d'opération d'excrétion pendant le transport des cellules: la collecte des cellules excrétées est centrifugée, lavée une fois avec du PBS, centrifugée pour excréter le nettoyage, dans le tube de centrifugation, ajouter 1 mL d'enzyme dans la digestion par soufflage pendant environ 20 secondes, plus jouer avec le milieu entier pour terminer la digestion après la centrifugation pour rouvrir, les cellules restantes sont traitées selon la méthode normale de passage des cellules.

5) Remarque: le milieu de culture utilisé pour le transport (milieu de culture de perfusion) ne peut plus être utilisé pour cultiver les cellules, veuillez remplacer le milieu de culture complet nouvellement formulé conformément aux conditions de culture cellulaire des instructions pour cultiver les cellules. Le premier passage après réception des cellules est recommandé pour le passage du flacon de culture t25 1: 2.

Iii. Opérations de culture cellulaire

1) Cellules réanimées: le traitement de lyophilisation de culture cellulaire suivant est fourni à titre de référence uniquement, les étapes opérationnelles spécifiques sont dominées par les instructions du produit livré, le lyophilisateur contenant 1 ml de suspension cellulaire est rapidement secoué dans un bain - Marie à 37 ° C pour décongeler, plus 4 ml de milieu de culture mélangé uniformément. Centrifuger 3 min à 1000 RPM, éliminer le surnageant et bien souffler après addition de 1 - 2 ml de milieu. Toutes les suspensions cellulaires sont ensuite mises en culture pendant une nuit dans des flacons contenant la quantité appropriée de milieu (ou dans des boîtes de 6 cm, ajouter environ 4 ml de milieu entier de jeu et mettre en culture pendant une nuit). Changez de liquide le troisième jour et vérifiez la densité cellulaire.

2) Passage cellulaire: si la densité cellulaire atteint 80% - 90%, la culture de passage peut être effectuée.

A) jeter le surnageant de culture et rincer les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium, magnésium.

B) Ajouter 1 ml de digestat (0,25% Trypsin - 0,02�ta) dans le flacon de culture pour permettre au digestat d'infiltrer toutes les cellules, placer le flacon de culture dans un incubateur à 37 ° C pour digérer pendant 1 - 3 min (selon la digestion des cellules), puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si la plupart des cellules deviennent rondes et tombent, revenir rapidement à la table d'opération, tapoter quelques fois sur le flacon de culture après avoir ajouté 2 - 3 ml de milieu de culture complet pour terminer la digestion.

C) Bien mélanger doucement et charger dans un tube à centrifuger stérile, centrifuger à 1000 RPM pendant 5 min, éliminer le surnageant et bien souffler après avoir ajouté 1 - 2 ml de liquide de culture.

D) distribuer la suspension cellulaire dans des boîtes neuves contenant 8 ml de milieu ou dans des flacons à raison de 1: 2 et les placer dans des incubateurs.

Passage de cellules adhérentes Remarque:

Assurez - vous de laver le PBS.

L les cellules observent plusieurs fois plus pour maîtriser le temps, ne terminez pas la digestion sans que les cellules tombent fondamentalement, puis soufflez vers le bas, de sorte que les cellules se différencient et meurent plus facilement.

L Ne soufflez pas tout le temps sur les cellules

3) lyophilisation cellulaire: la lyophilisation cellulaire peut être effectuée lorsque la croissance cellulaire est en bon état. La bouteille t25 ci - dessous à titre d'exemple;

A) recueillir les cellules et le liquide de culture cellulaire, charger dans un tube de centrifugation stérile, centrifuger à 1000 RPM pendant 4 min, éliminer le surnageant, laver une fois avec du PBS, éliminer le PBS et effectuer un comptage cellulaire.

B) Ajouter le lyophilisat de cellules sans sérum en fonction du nombre de cellules, de sorte que la densité cellulaire soit de 1 × 10 ^ 6 ~ 1 × 10 ^ 7 / ML, mélanger doucement, chaque lyophilisateur conserve 1 ml de suspension cellulaire, faites attention au lyophilisateur pour bien identifier.

C) placez le tube de congélation dans le réfrigérateur à - 80 ℃, après 24 heures, passez à l'azote liquide pour le stockage par irrigation. Enregistrez la position de la lyophilisation pour la récupérer la prochaine fois.

Iv. Précautions de culture

1) problèmes avec les cellules, les cas de répétition

A) divers problèmes rencontrés pendant le transport des cellules, perte de cellules, rupture du corps de la bouteille, fuite importante de liquide de culture, etc., réémergence;

B) Le problème de la contamination cellulaire, s'il vous plaît dans les 3 jours suivant la réception du produit, nous présenter les résultats réels de l'expérience, vérifier après la réémission;

C) après 2 heures de repos des cellules expédiées à température normale, après 2 jours de réanimation des cellules expédiées congelées, la grande majorité des cellules n'ont pas survécu, (des photos réelles et claires de l'état des cellules doivent être fournies), réédition;

D) la glace sèche est conservée 2 jours après la réanimation des cellules expédiées ou les cellules expédiées à température normale sont restées pendant 2 heures et n'ont pas été ouvertes, la contamination est apparue, la réapparition;

E) Le problème de l'activité cellulaire, s'il vous plaît nous présenter des résultats expérimentaux réels dans les 7 jours suivant la réception du produit, l'identification de la viabilité des cellules par coloration au bleu Trypan, et des photos quotidiennes des cellules, après vérification et réédition;

F) Le jour de la réception des cellules, ainsi que le jour 2,3 s'il vous plaît prendre des photos, 3 jours ne sont pas informés, le produit est considéré comme qualifié. Les problèmes survenant dans les 4 à 7 jours nécessitent de fournir des photos des 3 jours précédant la réception des cellules et des photos des problèmes survenus avec les cellules et les étapes détaillées des opérations liées aux cellules, et de communiquer avec le technicien, qui décide que nous sommes responsables de la réémission.

2) cas où les cellules ont des problèmes et ne sont pas rééditées

A) la manipulation du client provoque une contamination cellulaire, sans réémission;

B) les erreurs de manipulation graves du client entraînent un mauvais état cellulaire et ne sont pas rééditées;

C) Les cellules qui ne sont pas causées par notre système de culture cellulaire recommandé ne sont pas en bon état et ne sont pas rééditées;

D) l'état des cellules n'est pas bon, les photos réelles et claires de l'état des cellules des 3 premiers jours de culture n'ont pas été fournies et ne sont pas rééditées;

E) Les cellules cultivées avec d'autres traitements qui causent des problèmes cellulaires ne sont pas rééditées;

F) Le délai de réception des cellules et de détection des problèmes de communication avec le personnel du service à la clientèle s'avère supérieur à 7 jours, sans réémission;

G) selon le cas

V. précautions

Toutes les cellules animales sont considérées comme potentiellement dangereuses sur le plan biologique et doivent être manipulées à l'intérieur d'une table de sécurité biologique de niveau 2, veuillez prendre soin de la protection, tous les déchets liquides et les ustensiles qui ont été en contact avec ces cellules doivent être éliminés après stérilisation.

2. Il est toujours recommandé d'utiliser des gants de protection, des vêtements et de porter un masque de protection lors de la réanimation des cellules conservées congelées. Remarque: l'immersion du lyophilisateur dans l'azote liquide peut fuir et se remplir lentement d'azote liquide. Lors de la décongélation, la transformation de l'azote liquide en phase gazeuse peut provoquer l'explosion du récipient ou le soufflage de son couvercle avec une force dangereuse, créant ainsi des débris volants causant des blessures aux personnes.

3.La cellule est à usage scientifique seulement!Les instructions sont pour référence seulement sous réserve des instructions d'arrivée réelles!