Kit de teinture trap

2 - 8 ℃ protégé de la lumière

1. La date d'expiration est celle qui est conservée dans les conditions requises avant que le kit ne soit déballé.
2. S'il vous plaît finir d'utiliser le réactif dès que possible après le déballage!

3 mois (Note: le liquide d'incubation à l'intérieur est une préparation unique, efficace pendant une semaine!)

Microscope

1. Tranches de paraffine
2. Tranches congelées
3. Frottis de cellules, rampant
4. Frottis sanguins, etc.

1 microscope optique
2. Cylindre de teinture
3. Pipette
4. Chronomètre
5. Boîte à glace

Eau pure

1. Diapositives
2. Tête d'aspiration
3. Gants jetables

1. Le liquide d'incubation Trap est facile à échouer, cette loi est appropriée pour poncer le frottis sanguin avec la peau, après séchage doit être teint à temps;
2. Lors de la teinture des tranches congelées, le temps d'exposition des tranches à la température ambiante doit être réduit.
3. L'échantillon doit être frais, il doit être traité immédiatement après l'extraction, sinon il affectera l'activité de l'enzyme.
4. La fixation des tissus doit être effectuée dans un réfrigérateur à 4 ℃, le temps ne doit pas dépasser 24h, sinon l'activité enzymatique diminuera ou disparaîtra.
5. Les tranches de paraffine ne sont généralement pas recommandées. S'il est nécessaire de trancher avec de la paraffine, la température ne doit pas dépasser 56 ° C lorsque le tissu est enveloppé dans de la paraffine. La cire de trempage doit être effectuée à l'aide de paraffine avec un point de fusion de 52 à 54 ℃, le temps de trempage de la cire doit être court, sinon l'activité enzymatique diminuera ou disparaîtra.
6. Les tranches de paraffine n'ont pas besoin d'être fixées.

(Remarque: le liquide d'incubation à l'intérieur est une préparation unique, efficace pendant une semaine!)
Remarque: d'autres liquides de travail s'il vous plaît être fraîchement formulé avant utilisation, immédiatement après la formulation, une fois utilisé, ne peut pas être placé.

Traitement colorant des échantillons:
I. frottis sanguins et frottis de moelle osseuse
1, le Push:
Prenez du sang total ou de la moelle osseuse 3ul sur la lame gauche et droite, maintenez la lame de poussée à un angle de 30 ° avec la lame, placez - la directement en avant de la goutte de sang, déplacez - vous légèrement en arrière pour entrer en contact avec la goutte de sang, la goutte de sang se disperse le long du bord inférieur de la lame de poussée, la vitesse de réalimentation glisser en douceur vers l'avant le long du plan de la lame, jusqu'à ce que la goutte de sang a fini la memb Ne soyez pas trop mince pour ne pas avoir trop peu de cellules, ni trop épais pour ne pas trop se chevaucher.
2, fixe:
Laissez le frottis sécher naturellement à l'air, puis placez - le dans le liquide de fixation a de ce kit pendant 2 à 3 minutes et lavez - le à l'eau pendant 30 à 60 secondes.
3, incubation:
Incuber à l'abri de la lumière pendant 60 minutes dans le substrat d'incubation avant de sécher après lavage à l'eau. L'effet de teinture devient mauvais après trop sec.
4, repeindre:
Une fois l'incubation terminée, rincer à l'eau pendant 1 minute et repeindre les lames avant qu'elles ne soient sèches. Peut être reconditionné avec de la thréonine pendant 1 - 2 minutes, ou avec du vert de méthyle pendant 2 - 3 minutes, les deux optionnellement un.

II. Frottis cellulaires et cellules rampantes
1, fixe:
Placez le frottis cellulaire ou le crampon cellulaire dans le liquide de fixation a de ce kit pendant 2 à 3 minutes et lavez - le à l'eau pendant 30 à 60 secondes.
2, incubation:
Incuber à l'abri de la lumière pendant 60 minutes dans le substrat d'incubation avant de sécher après lavage à l'eau. L'effet de teinture devient mauvais après trop sec.
3, repeint:
Une fois l'incubation terminée, rincer à l'eau pendant 1 minute et repeindre les lames avant qu'elles ne soient sèches. Peut être reconditionné avec de la thréonine pendant 1 - 2 minutes, ou avec du vert de méthyle pendant 2 - 3 minutes, les deux optionnellement un.

Iii. Tranches congelées
1, retour à la température:
Placez les tranches congelées conservées au réfrigérateur à - 20 ° C sur le porte - tranches pour les réchauffer pendant 5 à 10 minutes. Il peut être placé dans un incubateur à 37 ° C pour le réchauffage, ou le rack à tranches est placé dans une petite boîte, la boîte est placée dans un bain - Marie à 37 ° C pour le réchauffage.
2, hydratation:
Retourner les tranches chaudes et laisser tremper dans l'eau pendant 1 à 2 minutes.
3, fixe:
Laissez les tranches sécher naturellement à l'air, puis placez - les dans le liquide de fixation de ce kit pendant 2 à 3 minutes et lavez - les à l'eau pendant 30 à 60 secondes.
4, incubation:
Incuber à l'abri de la lumière pendant 60 minutes dans le substrat d'incubation avant de sécher après lavage à l'eau. L'effet de teinture devient mauvais après trop sec.
5, repeindre:
Une fois l'incubation terminée, rincer à l'eau pendant 1 minute et repeindre les lames avant qu'elles ne soient sèches. Peut être reconditionné avec de la thréonine pendant 1 - 2 minutes, ou avec du vert de méthyle pendant 2 - 3 minutes, les deux optionnellement un.

Iv. Tranches de paraffine
1, déparaffinage:
Déparaffiner dans le xylène pendant 5 à 10 minutes. Changez pour déparaffiner avec du xylène frais pendant 5 à 10 minutes supplémentaires.
2, immersion:
Laisser infuser 5 minutes à l'éthanol anhydre. 2 minutes supplémentaires avec de l'éthanol à 90%, 70% respectivement.
3, hydratation:
Faire tremper dans l'eau distillée pendant 2 minutes.
4, incubation:
Incuber à l'abri de la lumière dans le liquide d'incubation du substrat avant de sécher pendant 60 minutes. L'effet de teinture devient mauvais après trop sec.
5, repeindre:
Une fois l'incubation terminée, rincer à l'eau pendant 1 minute et repeindre les lames avant qu'elles ne soient sèches. Peut être reconditionné avec de la thréonine pendant 1 - 2 minutes, ou avec du vert de méthyle pendant 2 - 3 minutes, les deux optionnellement un.

Analyse des résultats:
Les réactions positives sont des particules rouge vif ou rouge foncé localisées dans le cytoplasme.

1 Induction cellulaire infructueuse?
La qualité des Cytokines est importante lorsque les lignées cellulaires ou les cellules BMM primaires induisent des ostéoclastes. Lorsque l'induction n'est pas efficace, vous pouvez envisager d'ajuster les conditions d'induction, d'augmenter la concentration de rankl ou d'essayer d'ajouter ou non du M - CSF.

2. Comment juger les cellules positives?
Généralement pas illustré par des changements morphologiques, les cellules raw sont très morphologiquement très diverses et les changements morphologiques ne disent rien. On considère généralement qu'un polynucléaire plus un Trap positif est un ostéoclaste polynucléaire.

1.Guiping Chen et al.
Bergapten supprime l'ostéoclastogénèse induite par RANKL et l'ostéoporose induite par ovariectomie par la suppression des voies de signalisation NF-κB et JNK
Communications de recherche biochimique et biophysique 2019

2.Wen-Yong Fei et al.
Magnolol empêche la perte osseuse induite par l’ovaiectomie en supprimant l’ostéoclastogénèse par l’inhibition du facteur nucléaire-κB et des voies de protéine kinase activées par le mitogène
Journal international de médecine moléculaire 2019