CTF - ltm 2D kit de détection de viabilité cellulaire fluorescente

Il existe de nombreuses méthodes de détection de la viabilité cellulaire, telles que la détection de l'exclusion de colorant, des changements dans la concentration d'ATP, des changements dans l'activité enzymatique, etc. La détection cellulaire nécessite parfois une étude mécaniste de la Cytotoxicité et / ou la mise en place de contrôles endoréférentiels, d'où la nécessité d'une analyse multiple (multiplex), c'est - à - dire d'une détection d'un même échantillon par plusieurs méthodes analytiques, différentes les unes des autres par leurs mécanismes de détection et non interférant les unes avec les autres, permettant ainsi d'effectuer des couples de corrélation, révélant ainsi les mécanismes de la Cytotoxicité ou excluant les différences systémiques. Les produits étrangers de la catégorie celltiter fluor (CTF) sont conçus sur ce principe. La société a développé et lancé son propre kit de test de viabilité cellulaire fluorescent, qui ne diffère pas significativement des produits de marques étrangères en termes de performances. Ce produit est basé sur la dégradation du produit substrat du Groupe polypeptide - Fluorescent par la protéase à l'intérieur des cellules vivantes, produisant un signal Fluorescent. Lorsque l'intégrité de la membrane cellulaire est compromise, cette protéase perd son activité de dégradation du substrat et ne produit pas de signal Fluorescent. CTF-LTMContrairement au principe de détection du kit luciférase, la méthode de détection est également différente, sa sensibilité de détection est inférieure à celle de la méthode luciférase, mais des dommages cellulaires mineurs plus tôt peuvent être détectés, les deux tests sont bien compatibles et peuvent être testés multiplex.
Caractéristiques du produit:
1, performance
Détecter le signal, Window， La sensibilité et la spécificité sont similaires à celles des marques étrangères similaires.
2、 相容性
Compatible avec les réactifs analytiques courants tels que le CTG et ne forme pas d'influence mutuelle.
3, caractéristiques
Plus sensible aux lésions membranaires précoces des cellules.
4, pratique
"Join - mixed incubation - Detection", l'ensemble des étapes expérimentales sont simples et faciles à utiliser.
Composition du produit:
Substrat de protéase, le tampon étant mélangé et rempli dans des flacons bruns de 10 ml ou 100 ml et dans des tubes de 2 ml, selon les spécifications suivantes:

1, préparation cellulaire:
(1) étaler une densité appropriée de cellules à détecter sur des plaques de culture cellulaire 96 ou 384 puits. Il est recommandé d'utiliser un tableau noir (si combiné avec un agent Luminescent, un tableau blanc peut être sélectionné).
(2) Préparer le composé à examiner. Une concentration appropriée du composé à détecter est ajoutée dans les puits de la plaque cellulaire. La concentration de solvant organique dans le liquide de culture est maintenue en dessous de 1 à 2%. Mettre en place un groupe témoin sans composé ajouté. Continuer à cultiver le bon moment en fonction des besoins du projet.
2, détection de viabilité cellulaire:
(1) Retirer le CTF - lTMRéactif de détection de viabilité cellulaire, le tampon CTF Wan est équilibré à température ambiante après dissolution totale. Les oscillations Vortex du substrat CTF mélangent son fond et la centrifugation instantanée recueille le substrat CTF au fond du tube.
(2) Formulation du liquide réactionnel CTF: le substrat CTF est 100X, selon la quantité utilisée pour combiner le tampon CTF avec 1x liquide réactionnel, bien mélanger.
(3) Retirez la plaque de culture cellulaire à tester et ajoutez un volume égal de réactif CTF par puits, par exemple 100 µl de réactif CTF à 100 µl de réactif CTF 1x.
(4) la plaque de résonance à basse vitesse est malaxée pendant 20 secondes, protégée de la lumière 37 ℃ après 60 min de réaction pour la détection de fluorescence. Différentes cellules coupent le substrat CTF à des vitesses différentes et le temps de lecture optimal de la plaque doit être optimisé en fonction des cellules. La plaque de lecture peut être effectuée dès 30 minutes après l'ajout du réactif. Le rapport signal / bruit résultant de la lecture de la plaque est généralement plus élevé après 60 minutes ou plus. Il est recommandé que le temps de lecture de la planche ne dépasse pas 3 heures.
(5) lire le signal Fluorescent sur un lecteur de plaques fluorescent, excitation ex 380 - 400nm, émission de lumière em 505nm.
(6) Poursuivre les analyses multiples en aval, par exemple la détection de l'apoptose Caspases 3 / 7, si nécessaire.

1, après l'utilisation initiale, il est recommandé de séparer le substrat - 20 ℃ pour la conservation, chaque fois que le liquide réactionnel est fraîchement formulé.
2, non strictement vérifié, il n'est pas recommandé de changer la quantité de réactif de réaction à volonté.

- 20 ° C et moins à l'abri de la lumière, valable 12 mois.