Kit de détection de luciférase nluc

La nluc - luciférase est une enzyme génétiquement modifiée à petite molécule (19,1 kDa) qui est la protéine du gène Rapporteur bioluminescent de performance Zhuo. Il est environ 150 fois plus lumineux que les luciférases des lucioles du rein marin (photinus pyralis) et l'utilisation d'un nouvel analogue de la cavité intestinale (furimazine) produit un signal lumineux de haute intensité de type Luminescent. Cette réaction de Luminescence ne dépend pas de l'ATP tout en obtenant la sensibilité de détection la plus élevée en inhibant le signal de Luminescence de fond.
Le kit nluc Reporter Gene Assay fournit un réactif simple, à ajouter en une seule fois, caractérisé par une grande sensibilité, qui produit un signal fort en présence de la luciférase nluc.
Composants du produit:

1, matériel propre:
PBS； Plusieurs coups de feu; Plaque de culture cellulaire blanche imperméable à la lumière / noire; Chimiluminescence ou étalon enzymatique.
2, préparation avant la détection:
(1) le substrat de détection nluc (50x) et le tampon de substrat de détection nluc sont préalablement placés à température ambiante.
(2) Mélanger la quantité appropriée de substrat de détection nluc (50 ×) avec le tampon de substrat de détection nluc dans un rapport de 1: 50, en fonction de la quantité réelle utilisée, à température ambiante et à l'abri de la lumière. Par exemple: Si vous avez besoin de 10 ml de liquide réactionnel, vous devez ajouter 0,2 ml de substrat de détection.
Remarque: il est recommandé d'utiliser le liquide réactionnel restant contenant le nouveau substrat et de ne pas le conserver après la fin de l'expérience.
3, méthode de fonctionnement:
(1) Retirez la plaque de culture cellulaire de l'incubateur de culture cellulaire, laissez - la pendant 5 à 15 minutes et revenez à la température ambiante.
Remarque: utilisez des plaques de culture cellulaire blanches imperméables à la lumière ou noires pour réduire les interférences de signal entre les puits.
(2) Ajouter la solution de détection
Un liquide réactionnel contenant le substrat, équilibré à température ambiante, est ajouté à chaque puits cellulaire à l'aide d'un pistolet à plusieurs voies, le volume d'addition étant identique au volume de liquide de culture cellulaire et mélangé. Par example, une plaque de 96 puits est généralement additionnée de 80 à 100 µl de liquide de culture et de 80 à 100 µl de solution de détection en correspondance; Les plaques 384 puits sont généralement additionnées de 20 à 30 µl de liquide de culture et de 20 à 30 µl de solution de détection en conséquence.
(3) Détection lumineuse
L'activité du gène Rapporteur de la luciférase nluc est détectée dans un chimiluminescent ou un étalon enzymatique après mélange.
Remarque: pour obtenir les meilleurs résultats de test, veuillez compléter le test dans les 1 heure suivant l'ajout du réactif de test.
Analyse des données:
(1) Conception expérimentale: selon différents objectifs expérimentaux, un groupe témoin, un groupe expérimental et un groupe témoin vierge doivent être placés dans chaque plaque de culture. Pour garantir la précision de l'expérience, les mesures de Luminescence de la luciférase de Firefly devraient théoriquement être soustraites pour chaque groupe expérimental, y compris le groupe témoin.
① groupe témoin vide:
Fond F: cellules non transfectées + réactif.
Remarque: le témoin blanc doit avoir la même quantité d'échantillon que l'échantillon expérimental, contenir la même combinaison milieu / sérum que l'échantillon expérimental, plus le même réactif de détection.
② groupe expérimental: les cellules transfectées ont été traitées par un composé expérimental (c. - à - d. Groupe expérimental f).
③ groupe témoin: les cellules transfectées ne sont pas traitées pour normaliser les résultats (c. - à - D. groupe témoin f).
(2) résultat du calcul:
Groupe expérimental = Groupe expérimental F - contexte f.
Groupe témoin = groupe témoin F - fond f.
Multiple d'expression = Groupe expérimental / témoin.

- 20 ° C de conservation, valable un an. Nluc substrat de détection (50 ×) recommandé pour la conservation de - 80 ℃.

La réaction enzymatique est plus sensible à la température, tous les réactifs doivent être équilibrés à la température ambiante (20 - 25 ℃) avant le test d'addition;
2, vous devez utiliser une plaque de 96 trous blanche ou noire lors de la détection. Si vous utilisez une plaque transparente ordinaire de 96 trous, il y aura des interférences mutuelles entre les trous adjacents;
3, instrument de détection: les instruments qui peuvent détecter la chimiluminescence sont tous applicables, mais en raison du réglage et de la sensibilité différents des différents instruments, la valeur du signal lumineux mesurée sera également différente;
4, essai de fluorimètre à tube unique, chaque échantillon après mélange avec le réactif d'essai jusqu'au temps avant l'essai doit être cohérent;
5, pour votre propre sécurité, veuillez faire une protection efficace avant l'expérience;