Fluo - 8 am kit de détection de flux de calcium cellulaire sans lavage

NégociableMise à jour sur05/06

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Vue d'ensemble

Fluo - 8 am kit de détection de flux de calcium cellulaire sans lavage $R $N de nombreuses réactions biologiques importantes intracellulaires sont impliquées dans le flux de calcium. La détection des changements instantanés du flux de calcium intracellulaire est essentielle à l'étude des réponses biologiques intracellulaires et à la recherche et au développement de médicaments ciblés. La méthode de colorant Fluorescent de liaison spécifique au calcium est un moyen couramment utilisé pour détecter le flux de calcium intracellulaire.

Détails du produit

Aperçu

Description

La détection des changements instantanés du flux de calcium intracellulaire est essentielle à l'étude des réponses biologiques intracellulaires et à la recherche et au développement de médicaments ciblés. La méthode de colorant Fluorescent de liaison spécifique au calcium est une méthode couramment utilisée pour détecter le flux de calcium intracellulaire. Fluo - 8 am améliore le chargement cellulaire et la réactivité au calcium en tant que colorant de détection de flux de calcium de nouvelle génération et est le puissant colorant Fluorescent lié spécifiquement au calcium actuel, qui est deux fois plus Fluorescent que fluo - 4 am et quatre fois plus lumineux que fluo - 3 am. L'amour doit croireFluo - 8 am kit de détection de flux de calcium cellulaire sans lavageLe lavage cellulaire et l'élimination des réactifs de chargement de cellules fluo - 8 ne sont pas nécessaires lors du chargement de cellules fluo - 8 et de la détection du flux de calcium, ce qui simplifie le processus expérimental et convient particulièrement aux expériences de criblage à haut débit de composés.

Composition du produit

Fluo - 8 am kit de détection de flux de calcium cellulaire sans lavageLes composants et les spécifications sont les suivants. Les quantités recommandées pour le réactif de chargement cellulaire fluo - 8 sont de 96 - 100 µl par puits pour les plaques à puits et de 25 µl par puits pour les plaques à 384 puits. 96T, 960t et 9600t peuvent compléter des expériences avec 1, 10 et 100 plaques 96 - puits ou 384 - puits, respectivement.

Composants	96T	960T	9600T
Tampon de chargement fluo - 8	10 ml	100 ml	10 x 100 ml
Fluo-8 AM (400x)	25 μL	250 μL	10 × 250μL
Réactif qf (10x)	1 ml	10 ml	10 × 10mL

mode d'emploi

1, selon les besoins expérimentaux pour ensemencer les cellules dans 96 - puits ou 384 - puits fond clair plaque de culture de cellules noires, la concentration sérique du milieu de culture cellulaire ne dépasse pas 10%. 37 ℃ 5% CO selon les besoins expérimentaux2Incuber la boîte pendant un certain temps.
2, retirez le tampon de chargement fluo - 8 et le réactif qf (10x), équilibrez à la température ambiante et mélangez bien.
3, retirer fluo - 8 am, la température ambiante se dissout, le contenu est recueilli par centrifugation sur le fond du tube et placé sur la glace. Si fluo - 8 am n'est pas utilisé une fois, le Sous - assemblage doit être effectué, - 20 ℃ conservation à l'abri de la lumière, éviter le gel et la dégel répétés.
4, calculer la quantité requise de réactif de chargement de cellules fluo - 8 par volume égal de réactif de chargement de cellules fluo - 8 par ajout de puits et de milieu de culture intra - puits
5, formule de réactif de chargement de cellules fluo - 8: ajouter le réactif 10x qf dans le tampon de chargement fluo - 8 comme dilution 10x, par exemple 1ml de réactif 10x qf dans 9ml de tampon de chargement fluo - 8, bien mélanger. Fluo - 8 am est 400x, ajouter le tampon de chargement fluo - 8 formulé ci - dessus (contenant 1x qf) comme 1x, qui charge le réactif pour les cellules fluo - 8.
Certaines cellules, par exemple les cellules Cho, nécessitent l'ajout de probénécid (probenecid, cas: 57 - 66 - 9) au réactif de chargement cellulaire fluo - 8 pour inhiber le transport cellulaire du fluo - 8 entrant dans la cellule et sortant de la cellule. Le proposulfoshu est fourni par le client lui - même et la concentration finale de proposulfoshu recommandée pour l'ajout du réactif de charge cellulaire fluo - 8 est de 2,5 mm. Pour différentes cellules, la concentration optimale peut nécessiter une optimisation.
Proposulfoshu formulé:Formulé à 500 mm de solution brute avec NaOH 1n, il est ajouté au réactif de charge cellulaire fluo - 8 après dilution préalable à 250 mm avec du tampon hbss 1x à une concentration finale de 2,5 mm avant utilisation (Tampon hbss fourni par le client lui - même et formulé avec un tampon HEPES 20 mm pH 7,4 + Solution de sel équilibrée 1x Hank, pH 7,4).
7, test de méthode standard: ajouter et un volume égal de milieu de culture dans les puits de la plaque de culture cellulaire fluo - 8 réactif de chargement cellulaire, par exemple, plaque 96 puits 100 μl de milieu de culture par puits ajouter 100 μl de réactif de chargement cellulaire fluo - 8.
（Méthode de détection optionnelle:Le milieu contenant 10% de FBS peut réduire les valeurs de lecture et augmenter le fond, le milieu intraporeux peut être retiré, le réactif de chargement de cellules fluo - 8 mélangé 1: 1 (formulé aux étapes 5 et 6) et le tampon hbss sont ajoutés à ce mélange équivalent à 2 fois le volume de milieu de Culture original pour la détection. Ou culture cellulaire avec milieu de culture à faible concentration de FBS, détecté selon la méthode standard de l'étape 7.)
8, 37 ° C incuber pendant 1 heure. La température d'incubation spécifique (par exemple, la température ambiante ou 37 ° c) et la durée (0,5 H - 2 h ou plus) doivent être optimisées en fonction de l'expérience spécifique.
9, effectuer la détection du flux de calcium intracellulaire: selon les besoins expérimentaux et l'équipement de détection pour effectuer le paramètre de détection, ajouter le composé de test, la lecture inférieure pour détecter l'intensité de fluorescence. Les dispositifs de détection applicables incluent flexstation, flipr (Molecular Devices) et bien d'autres. Où flexstation 3 lit la fluorescence avec EX / em = 485 / 525 nm.

Performance

Méthodes de stockage / conservation

Le kit est conservé à l'abri de la lumière à - 20 ℃ ou moins après réception. Le tampon de chargement fluo - 8 et le réactif qf (10x) peuvent être conservés à l'abri de la lumière à 4 ℃ pendant 1 mois après l'utilisation initiale, fluo - 8 am doit être conservé à l'abri de la lumière à - 20 ℃ ou moins, à long terme (> 1 mois), conservation recommandée à - 80 ℃.

Précautions

1, le mélange n'est pas recommandé pour différents lots.
2, non vérifié, il n'est pas recommandé de changer la quantité de réactif de test.

Graphique des résultats expérimentaux

Ensemencement des cellules Hela en plaques noires 96 puits, densité 4×105Une cellule / ML. Les cellules sont mises en suspension dans une solution de culture de Hank contenant 1% de sérum de veau foetal (FBS). Après l'application des cellules, le liquide de culture de remplacement est du tampon de charge fluo - 8, 50 µl par puits. Les cellules sont incubées 1 heure à 37°c. Retirer le tampon de charge et ajouter le réactif de détection, 100 µl par puits. La signalisation calcique a été détectée sur un étalon enzymatique flexstation 3, tout en ajoutant une série d'agonistes dilués. Les valeurs de fluorescence avant et après stimulation de l'agoniste ont été enregistrées (excitation / émission = 485 / 525 nm) et la concentration efficace de moitié (CE50) de l'agoniste a été calculée (les résultats sont cohérents avec les données rapportées).

Conseils chaleureux: ce produit est utilisé uniquement pour la recherche scientifique et expérimentale, ne supporte pas les études cliniques et autres

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