Cellules leucémiques monocytaires humaines THP - 1

Cellules leucémiques monocytaires humaines THP - 1

【THP1; O-THP-1; Tohoku Hospital Pediatrics-1】

L identification des cellules

La qualification Str est passée

L source des cellules

Bibliothèque de ressources nationales

L fond cellulaire

Il a été établi à partir du sang périphérique de garçons de 1 an atteints de leucémie monocytaire aiguë (Lam) qui a récidivé en 1978. La Cellule peut dévorer les perles de lait et les globules rouges activés sans immunoglobulines de surface et cytoplasmiques. La différenciation des monocytes peut être induite avec le phorbol TPA.

Remarque: la mutation nras est incorrectement indiquée comme P. gly12ser dans PubMed = 9379676.

L caractéristiques des cellules

1) Source: leucémie monocytaire aiguë, monocytes

2) morphologie: monocytes, en suspension

3) Contenu: > 1x106 nombre de cellules

4) Spécification: bouteille de t25 ou paquet de lyophilisateur de 1ml

5) Utilisation: utilisation scientifique seulement

L conditions de culture

1) Préparer le milieu rpmi - 1640 (awcell - 0002 recommandé); Sérum de veau foetal de haute qualité, 10%; 0,05 mm de bêta - Qiu - éthanol (niveau de culture cellulaire recommandé: awcell - 8211); Double résistance, 1%.

2) Rapport de passage de référence: la densité cellulaire contrôlée au passage est de 2 - 4 × 105 cell / ML et le passage est effectué lorsque les cellules sont cultivées à 8 - 10 × 105 cell / ML.

3) Fréquence de changement de liquide de référence: changement de liquide pendant le passage.

4) conditions de culture: phase gazeuse: air, 95%; CO2, 5%. Température: 37 degrés Celsius, l'humidité de l'incubateur est de 70% - 80%.

5) réservoir congelé: * bouillon de culture 95%, DMSO 5% (après l'utilisation de ce réservoir congelé, le taux de survie de la réanimation est d'environ 50% selon l'expérience de ma banque, la réanimation nécessite une culture supplémentaire de 7 à 10 jours pour reprendre la croissance)

L précautions

[Note]:

La cellule est une cellule en suspension, selon l'expérience de culture ainsi que les commentaires des clients, l'utilisation de la méthode de demi - échange lors du passage est plus favorable à l'état cellulaire, donc ma bibliothèque vous recommande d'utiliser la méthode de demi - échange pour le passage.

1. Après avoir reçu les cellules que nous vous proposons d'expédier avec un tube de centrifugation de 15 ml, veuillez ne pas collecter les cellules par centrifugation, vous pouvez préparer deux nouveaux flacons de culture t25 d'abord, puis mélanger les cellules uniformément après les avoir transférées dans deux nouveaux flacons de culture t25, compléter le milieu de culture à 10 ml. Mettre dans un incubateur à 37 ℃.

2. Vous recevez des cellules expédiées avec des flacons de culture t25, s'il vous plaît recueillir les cellules d'abord par centrifugation, puis remettre les cellules en suspension dans 12mL de milieu de culture * configuré selon les instructions après avoir soufflé uniformément dans deux nouveaux flacons de culture t25 pour la culture.

3. THP - 1 cellules en suspension. La cellule préfère un traitement doux lorsqu'elle est cultivée, ce qui entraîne le moins de dommages à la cellule en la centrifugant. Ne remplacez pas le milieu entier lors du changement de liquide, il est recommandé d'utiliser la méthode du demi - changement de liquide pour le passage, ajouter le milieu de culture cellulaire pour diluer les cellules jusqu'à ce que la densité soit maintenue.

4. Les cellules sont plus sensibles à la qualité du sérum, notre banque vous recommande d'utiliser le sérum de qualité de marque importée pour la culture. FBS ne pas inactiver, si la croissance cellulaire est lente essayez d'utiliser un autre FBS ou augmenter temporairement la concentration de FBS à 20%

L'ajout de bêta - Qiu éthanol (niveau de culture cellulaire) dans le liquide de culture de cette cellule peut avoir un impact sur l'état de la cellule si elle n'est pas ajoutée.

La stabilité du β - Qiu - éthanol est limitée et le β - Qiu - éthanol ne peut pas être ajouté au milieu de culture * pour un stockage à moyen et long terme, le β - mercaptoéthanol étant ajouté à chaque passage ou ajout liquide.

Le β - Qiu - yléthanol (2 - Qiu - yléthanol) est ajouté aux lymphocytes ou à d'autres cultures cellulaires, car l'acide aminé cystéine n'est pas disponible dans le FBS utilisé dans le milieu de culture, alors que la cystéine est abondante. Certaines cellules (par exemple, les cellules T) ne peuvent pas transporter la cystéine dans le cytoplasme et doivent la convertir en cystéine. Le bêta - Qiu - éthanol réduit la Cystine sous une forme qui peut être transportée par les cellules, puis convertie en cystéine nécessaire à la croissance cellulaire. Le bêta - Qiu - yléthanol est également un agent réducteur qui peut décomposer de nombreux métabolites toxiques produits par les cellules en culture, améliorant ainsi l'environnement autour des cellules.

6. La cellule est plus sensible à la densité cellulaire, lors de la culture, le passage, s'il vous plaît prendre soin de maintenir la densité cellulaire dans la gamme appropriée (veuillez consulter les instructions de la cellule pour plus de détails).

7. Le taux de réanimation après la congélation de la cellule est faible, s'il vous plaît augmenter la quantité de cellules en cas de congélation

8. Normalement, il est possible de maintenir la croissance des cellules en ajoutant * milieu de culture aux cellules en croissance, tous les 7 jours, les cellules peuvent être centrifugées et suspendues dans le milieu nouvellement apparié pour compléter le remplacement complet des cellules.

Instructions de l'ATCC concernant le maintien de la viabilité cellulaire par les cellules THP - 1

dispositif=modal

(un comptage cellulaire fréquent est le meilleur moyen de surveiller la THP - 1. Ces cellules doivent être cultivées tous les 2 à 3 jours en ajoutant simplement une petite quantité de milieu frais dans le flacon (ce qui leur donne un milieu conditionné). Vous n'avez pas besoin de centrifuger les cellules et de les réacheminer à chaque fois. Lorsqu'elles sont cultivées dans notre laboratoire, les cellules peuvent généralement être amplifiées dans des flacons plus grands avec plus de milieu de culture au jour 2. Le passage est nécessaire lorsque la densité cellulaire atteint 8 × 10 5 cellules vivantes / ML. Les densités cellulaires supérieures à 1 × 10 (6) cellules vivantes / ML ne sont pas autorisées.)

1. Jeter le surnageant de culture et laver les cellules 1 - 2 fois avec du PBS sans ions calcium et magnésium.

Ajouter 0,25% (P / v) trypsine - 0,53 mm EDTA dans un flacon de culture (flacon t25 1 - 2 ml, flacon T75 2 - 3 mL), placer dans un incubateur à 37 ° C pendant 1 - 2 minutes pour la digestion (les cellules difficiles à digérer peuvent prolonger correctement le temps de digestion), puis observer la digestion des cellules sous un microscope, si une grande partie des cellules s'arrondit et tombe, revenir rapidement à la table d'opération, tapoter quelques flacons de culture après l'ajout de 3 - 4 ml de milieu de culture contenant 10 s pour terminer la digestion.

3. Bien mélanger doucement et bien aspirer, centrifuger à 1000 RPM pendant 3 - 5 min, jeter le surnageant, ajouter 1 - 2 ml de solution de culture et bien souffler. La suspension cellulaire est divisée dans de nouveaux flacons t25 dans un rapport de 1: 2, 6 - 8 ml d'un nouveau * Milieu configuré selon les instructions sont ajoutés pour maintenir la viabilité de croissance des cellules, et les passages suivants sont effectués dans un rapport de 1: 2 ~ 1: 5 selon la réalité.

3) lyophilisation cellulaire: après réception des cellules, il est recommandé de lyophiliser un lot de semences cellulaires pour une utilisation expérimentale ultérieure au cours des 3 premières générations de culture.

4) le milieu utilisé pour le transport (milieu de culture de perfusion) ne peut plus être utilisé pour cultiver les cellules, veuillez remplacer le milieu * nouvellement formulé conformément aux conditions de culture cellulaire des instructions pour cultiver les cellules. Le premier passage après réception des cellules est recommandé pour le passage du flacon de culture t25 1: 2.

L forme de transport

Basse température: (1) 1ml tube de congélation emballé pour le transport de glace sèche, après réception - 80 degrés réfrigérateur conservé pendant la nuit après le transfert à l'azote liquide ou la réanimation directe, si la glace sèche a été volatilisée propre, le bouchon du tube de congélation est tombé, cassé et les cellules sont contaminées, s'il vous plaît contactez - nous immédiatement.

Température normale: (2) Les cellules viables réanimées par le flacon t25 sont expédiées à température normale, après réception, en suivant la méthode de traitement après réception cellulaire.

L biosécurité

Toutes les cellules animales sont considérées comme potentiellement dangereuses sur le plan biologique et doivent être manipulées à l'intérieur d'une table de sécurité biologique de niveau 2, veuillez prendre soin de la protection, tous les déchets liquides et les ustensiles qui ont été en contact avec ces cellules doivent être éliminés après stérilisation.

2. Il est toujours recommandé d'utiliser des gants de protection, des vêtements et de porter un masque de protection lors de la réanimation des cellules conservées congelées. Remarque: l'immersion du lyophilisateur dans l'azote liquide peut fuir et se remplir lentement d'azote liquide. Lors de la décongélation, la transformation de l'azote liquide en phase gazeuse peut provoquer l'explosion du récipient ou le soufflage de son couvercle avec une force dangereuse, créant ainsi des débris volants causant des blessures aux personnes.