Expériences moléculaires interactions moléculaires: emsa gel migration Blocking Experiment

I. Introduction technique

La technologie emsa, c’est - à - dire les expériences de mobilité par gel ou électrophorèse, pour les techniques d’étude des interactions entre les protéines de liaison ADN / ARN et leurs séquences de liaison ADN / ARN associées;

II. Principes techniques

La protéine purifiée ou le soutirage brut de cellules est incubé avec une sonde d'ADN ou d'ARN marquée et la mobilité du complexe ADN - protéine ou ARN - protéine est plus lente que dans une sonde non liée par électrophorèse en gel de polyacrylamide non dénaturé, de sorte que des facteurs activés de transcription ou de régulation de la protéine liée à l'ADN ou à l'ARN sont détectés.

Iii. Scénarios d'application

Recherche sur la régulation de l'expression des gènes: identifier les sites de liaison et les propriétés de liaison des facteurs de transcription à l'ADN, étudier les mécanismes de régulation de l'expression des gènes.

Recherche sur le mécanisme de la maladie: analyse des anomalies dans la régulation de l'expression des gènes liés à la maladie et exploration des mécanismes de développement de la maladie.

3.drug Target Discovery: criblage et identification des protéines de liaison à l'ADN associées à la maladie pour fournir des cibles pour la recherche et le développement de médicaments.

Étude des voies de signalisation: étude des changements d'activité des protéines liant l'ADN dans les voies de signalisation et de leurs effets sur les gènes en aval.

Iv. Avantages techniques

1. L'opération expérimentale est relativement simple et n'est pas exigeante pour les conditions expérimentales.

2. Peut détecter de nombreuses tailles et structures de molécules d'acide nucléique et une large gamme de tailles de protéines, peut détecter la liaison de différentes protéines à différentes molécules d'acide nucléique dans un seul système réactionnel.

3. La sonde de marquage de biotine est stable, sûre, précise et de haute affinité.

V. types d'échantillons

Des cellules fraîches (cellules collées / cellules en suspension), des cellules lyophilisées, des tissus lyophilisés, des échantillons de nucléoprotéines ou des facteurs de transcription purifiés peuvent également être utilisés pour certaines expériences avec des protéines exprimées de manière recombinante.

Vi. Besoins en échantillons

Échantillons cellulaires: environ 1 × 10 ^ 7 (il peut s'agir d'une boîte de 10 cm ou stockée dans un tube à centrifuger sous forme de cellules en suspension, ou d'un flacon T75);

Tissu congelé: environ 400 mg;

Tissus végétaux: environ 2 G; nucléoprotéines, facteurs de transcription purifiés, protéines d'expression recombinantes, etc.: chaque Membrane fournit au moins 50 µl à une concentration d'au moins 0,5 mg / ML.

Vii. Préparation et transport des échantillons

Échantillons de cellules vivantes: les plus proches peuvent transporter des échantillons de cellules fraîches dans des boîtes de conserve / bouteilles T75 / tubes à centrifuger par courrier normal (au plus tard le lendemain), livraison flash ou livraison en personne dans la Ville, les plus éloignés peuvent transporter de la glace sèche cellulaire congelée à - 80 ℃;

Échantillons de tissus et autres échantillons liquides: - transport de glace sèche congelée à 80 ℃.

Viii. Réactifs à fournir

Les anticorps spécifiques de la protéine de liaison sont supérieurs à 50 µl à des concentrations supérieures à 0,5 mg / ML.

Ix. Cycle expérimental

2 - 3 semaines

X. Autres

Séquence de sonde, p. ex. séquence sans sonde, veuillez fournir des renseignements sur les protéines liant l'ADN ou de la littérature pertinente.