Expériences d'interaction moléculaire: co - précipitation immunologique IP / CO - IP

I. Introduction technique

IP (immunoprécipitation) et co - IP (co - immunoprécipitation) sont des technologies de base pour l'étude de la fonction et des interactions des protéines et sont largement utilisées dans les domaines de la biologie moléculaire et cellulaire.

II. Principes techniques

IP par anticorps spécifiques avec la protéine cibleLiaison, utilisant des anticorps pour séparer la protéine cible (c'est - à - dire l'antigène), détectant ainsi l'expression d'une certaine protéineTandis que co - IP est basé sur IP, vérifiant l'interaction entre les protéines. Détection de la protéine interopérante (protéine cible) à laquelle elle est liée par capture d'une protéine (protéine appât),DoncEnrichissement spécifique de la protéine d'intérêt étudiéeL'étude des protéines du complexe qui interagissent avec des protéines connues.

Iii. Scénarios d'application

• IP: enrichissement en protéines de faible abondance pour l'identification par spectrométrie de masse (IP - MS), vérification de la spécificité des anticorps.

• Co - IP: recherche sur les complexes de facteurs de transcription, les interactions Kinase - substrat et la validation des interactions connues ou la découverte de nouveaux partenaires d'interaction (tels que les complexes de voies de signalisation).

Iv. Avantages techniques

• IP: avec une spécificité élevée, dépend de la liaison exclusive anticorps - antigène.

• Flexibilité: support en option billes magnétiques (facile à utiliser, compatible avec l'automatisation) ou Agarose (capacité de liaison élevée).

• Co- IP: authenticité in vivo: ce qui est étudié est l'interaction protéique dans l'état naturel du corps, qui peut réagir pour comparer l'interaction protéique réelle.

V. types d'échantillons

Cellules fraîches (cellules collées / cellules en suspension), cellules lyophilisées, tissus lyophilisés, échantillons de lysat.

Vi. Besoins en échantillons

• Échantillons cellulaires: environ 5 × 10 ^ 6 (il peut s'agir de 2 boîtes de 6 cm ou stockées dans des tubes à centrifuger sous forme de cellules en suspension, ou de 2 flacons t25);

• Tissu lyophilisé: environ 40 mg; échantillon de lysat: la concentration en protéines n'est pas inférieure à 2 mg / mg et la quantité totale de protéines n'est pas inférieure à 3 mg.

Vii. Préparation et transport des échantillons

• Échantillons de cellules vivantes: des échantillons frais peuvent être fournis à une distance plus proche, des échantillons de cellules fraîches peuvent être expédiés par courrier normal (au plus tard le lendemain) à l'intérieur d'une boîte de conserve / bouteille t25 / tube de centrifugation, livraison flash ou livraison en personne dans la Ville, expédition de glace sèche cellulaire congelée à - 80 ℃;

• Échantillons de tissus et échantillons de lysat: - 80 ℃ transport de glace sèche congelée.

Viii. Réactifs à fournir

Détection des anticorps IB et des anticorps IP

Ix. Cycle expérimental

1 - 2 semaines (ne contient pas de spectrométrie de masse)

X. Autres

Tests ultérieurs Western Blot / spectrométrie de masse des protéines