Rnaclean RNA Clean kit de purification

la PCRQuels réactifs et équipements doivent être utilisés pour la réaction?

RéactifsPour:
modèleADNPour:la PCRModèle requis pour la réactionADNTels que l'extraction des cellules, des tissus, du sangADNEtc.; Amorces:la PCRDeux amorces de la réaction, respectivement avec le modèleADNLes deux extrémités de l'appariement des zones spécifiques nécessaires à l'amplification, les amorces peuvent également être synthétisées enTALes amorces utilisées dans des processus tels que le clonage;dNTPPour:la PCRQuatre sont nécessaires dans la réactiondNTP, y compris le désoxyadénylate (dATP), désoxythymidine (dCTP), désoxyguanylate (dGTP), acide désoxycytidinique (dTTP), pour la Division cellulaire,ADNProcessus biologiques tels que la synthèse, pourla PCRModèle pour l'amplificationADNExtension et amplification des chaînes;ADN de TaqPolymérase:la PCRPolymérases nécessaires à la réaction, utilisation généraleTaqPolymérases, il existe d'autres types de polymérases telles quePFUEt,PhusionEtc., pour l'amplificationADNLa chaîne;Tampon PCRSolution: Ouila PCRLa réaction a un effet tampon, régule la réactionLe pH, Hydrogénosulfate de thiosulfateSDS, de petites molécules de composés organiques tels que le formaldéhyde, peut renforcerla PCRSpécificité de la réaction et donc amélioration de l'efficacité de la réaction; Système de coupure enzymatique:la PCRL'amplification implique souvent des étapes expérimentales telles que la recombinaison, la construction et le séquençage et nécessite souvent des opérations de clivage enzymatique.MARQUE :Un critère de poids moléculaire pour discriminerADNOutil pour la taille des fragments.ADNKit de purification: pour la purificationla PCRLes produits de la réaction;
Équipement:
la PCRInstrumentation: pour contrôler la température de réaction, garantiela PCRContrôle strict des différents maillons de température lors de la réaction; Bain d'électrophorèse: pour la séparationla PCRProduits d'amplification; Extracteur d'acides nucléiques: extraction entièrement automatique des acides nucléiques à partir d'échantillons de tissus. Ces réactifs et équipements sontla PCRLes techniques de biologie moléculaire sont toutes, et ne peuvent être effectuées que sur une base ordonnée et complètela PCRRéagissez et obtenez des résultats précis.

Les produits de la société sont uniquement destinés à la recherche scientifique et ne doivent pas être utilisés pour le diagnostic clinique!

la PCRExpériences fondamentales associées:

la PCRLes étapes de base de la réaction la réaction en chaîne de la polymérase générale est réalisée par20à35Composition en cycles, chaque cycle comprenant:3Une étape:

I. dénaturation:

Utilisation de hautes températures (93-98℃) faire double chaîneADNLa séparation. La température élevée reliera deux barresADNLa liaison hydrogène de la chaîne est interrompue. Avant le premier cycle, il est courant de chauffer pendant un certain temps pour assurer la séparation du gabarit et des amorces, qui ne sont présents que sous forme de chaîne unique. Le temps de cette étape1 - 2Minutes, suivantla PCRL'appareil contrôle la température dans la phase de cycle.

II. Recuit ou assemblage nominal,Reproductibilité:

DansADNAprès séparation de la double chaîne, la température est abaissée de manière à ce que les amorces puissent se lier à une seule chaîneADNEn haut. La température à ce stade est généralement inférieure au point de fusion des amorces5℃Une température de recuit incorrecte peut entraîner des amorces qui ne se lient pas au gabarit ou qui se lient incorrectement. Le temps de cette étape1 - 2Minutes.

Iii. Extension:

ADNLa polymérase commence le long des amorces qui se lient au refroidissementADNLa chaîne synthétise des chaînes complémentaires. La température à ce stade dépendADNPolymérase. Le temps de cette étape dépend de la polymérase ainsi que de ce qui doit être synthétiséADNLongueur du fragment. TraditionnelleTaqSynthèse estimée1000bp/min, plus récenteTbr(à partir de bactéries ThermophilesFièvre buccale) environ40Secondes, polymérases de fusion produites par des entreprises commerciales seulement environ10 à 15Secondes.

Produits vendus par la société:Virus de l'hépatite canard méthode de sonde universelle Fluorescence Quantitative PCR kitVirus de l'hépatite du canard (DHV)

Kit PCR quantitative par fluorescence pour la méthode de détection du virus de la peste canardVirus de la peste du canard (DPV)

Kit PCR quantitative par fluorescence (pathogène et non pathogène) pour E. coli Universal Probe MethodE. coli

Kit PCR quantitatif Fluorescent par méthode de sonde Echinococcus finesEchinococcus granulosus

Echinococcus Universal Probe Method Kit PCR quantitatif fluorescentEchinococcus spp.

鮰 Edwardian méthode de sonde fluorescente Quantitative PCR kitEdwardsiella ictaluri

Kit PCR quantitatif par fluorescence pour la méthode de sonde universelle de la bactérie EdwardEdwardsiella spp.

Kit PCR quantitatif Fluorescent pour la méthode de sonde d'Edouard lentEdwardsiella tarda

RT - 1976 (RT - 76) virus du syndrome de réduction des oeufs de poulet RT - 1976 sonde méthode fluorescente Quantitative PCR kitVirus du syndrome de la goutte d'oeuf-1976(EDSV-76)-1976

Kit PCR quantitatif par fluorescence de la méthode de sonde d'elixia canin (elixia Canis)Ehrlichia canis

Kit PCR quantitative par fluorescence de méthode de sonde de chaffellithia (chaffellithia)Ehrlichia chaffeensis

Kit PCR quantitative par fluorescence par méthode de sonde de Ferguson erichsome (Ferguson ericksome)Érlichia fergusonii

Kit PCR quantitatif Fluorescent par détection d'aiguilles RichterEhrlichia risticii

Elixia Ruminant (erixia Ruminant) Méthode par sonde Kit PCR quantitatif fluorescentEhrlichia ruminantium

Kits PCR quantitatifs fluorescents par méthode de sonde universelle du genre allihi (ehrlichium)Les bactéries d'ellipse.

Kits PCR quantitatifs fluorescents pour la méthode de la sonde aikenia rongeuseEikenella corrodens

Kits PCR quantitatifs fluorescents par méthode de sonde universelle du genre aemeriaEimeria spp.

Kit PCR quantitatif Fluorescent par la méthode de la sonde de nématode de schönzlerElaeophora schneideri

Kit PCR quantitatif Fluorescent de la méthode de sonde de microbes d'imonEmmonsia parva

Protozoaires intracellulaires du genre générique · méthode sonde Fluorescence Quantitative PCR kitEncephalitozoon spp.

Kit PCR quantitatif Fluorescent par méthode de sonde d'amibe intratissulaire solubleEntamoeba histolytica

Kit PCR quantitatif Fluorescent par méthode de sonde universelle pour l'amibe interneEntamoeba spp.

Kit PCR quantitative par fluorescence pour la méthode de sonde d'adénovirus intestinal de type 41Adénovirus entérique41

Kit PCR quantitatif Fluorescent pour la méthode de la sonde E. coli entéro - invasiveE. coli invasif (EIEC)

Kit PCR quantitatif Fluorescent par méthode de sonde Escherichia coli entéro - adhésiveE.Coli entéroadhésif (EAEC)

Kit PCR quantitatif Fluorescent par méthode de sonde pour enterobacterium aerogenesL'aérogène des entérobactéries

Kit PCR quantitatif Fluorescent par la méthode de sonde d'Enterobacter cloacaeEnterobacter cloacae

Kit PCR quantitatif Fluorescent pour la méthode de sonde d'Enterobacter sakasakiEnterobacter sakazaki

Entérobacterium spp. Méthode de sonde universelle Kit PCR quantitatif fluorescentEnterobacter spp.

Kit PCR quantitatif Fluorescent par méthode de sonde d'entérocoque jaune de plombEnterococcus casseliflavus

Kit PCR quantitatif Fluorescent de la méthode de sonde d'entérocoque durableEnterococcus durans

Kit PCR quantitatif Fluorescent par la méthode de sonde d'Enterococcus faeciumEnterococcus faecalis

Kits PCR quantitatifs fluorescents de la méthode de sonde d'entérocoque de chieEnterococcus faecium

Kit PCR quantitatif Fluorescent par méthode de sonde universelle pour entérocoquesEnterococcus spp.

Kits PCR quantitatifs fluorescents par la méthode de la sonde de Microsporidia enterica de BeerEnterocytozoon bieneusi

Kit PCR quantitatif Fluorescent pour la méthode de sonde de microcytose hépatique et intestinal de crevetteEnterocytozoon hépatopénée (EHP)

Kit PCR quantitative par fluorescence pour E. coli entérohémorragique O104: H4 sérotype Probe MethodE. coli entérohémorragique (EHEC)

la PCROptimisation des conditions de réaction:

1, température et temps de dénaturation:

Modèle garantiADNLe désencombrement est la garantie de l'ensemblela PCRLa clé du succès de l'amplification. chauffer90~95°C, 30~60sPlus complexe.ADNLes molécules sont également variables en une seule chaîne. La température est trop élevée ou la température élevée dure trop longtemps, peut êtreTaqActivité enzymatique etdNTPLes molécules causent des dommages.

2, température et temps de réplicationPour:

la PCRLa spécificité d'amplification dépend de la liaison de l'amorce au gabarit lors de la Renaturation. Plus la température de Renaturation est élevée, plus la spécificité du produit est élevée. Plus la température de Renaturation est basse, plus la spécificité du produit est faible. Selon les amorcesTmLa valeur est définie spécifiquement.

3, température et temps d'extensionPour:

Généralement situéTaqTempérature d'action optimale de l'enzyme70~75°CEntre. Les amorces sont inférieures à16Lorsqu'un nucléotide, une température d'extension trop élevée n'est pas propice à la liaison des amorces au gabarit et peut se réchauffer lentement jusqu'à70~75°C. Le temps de réaction prolongé, qui peut être fonction de la longueur du fragment à amplifier, est inférieur à1ko, 1minSuffisant; supérieur à1 KoUn allongement du temps est nécessaire.TaqL'enzyme peut être basée sur1kb/minAugmenter le temps. Il est à noter ici qu'une amplification non spécifique peut se produire avec des temps d'élongation trop longs. Il est donc nécessaire de définir la bonne durée d'extension.

4Nombre de cyclesPour:

Une fois les autres paramètres sélectionnés,la PCRLe nombre de cycles dépend principalement du modèleADNLa concentration. Théoriquement parlant20〜25Après le cycle secondaire,la PCRL'accumulation du produit peut atteindre un maximum, impossible en pratique en raison du rendement de la réaction par étape100%, donc quelle que soit la concentration du gabarit,20 à 30Le nombre de cycles est plus raisonnable. Plus le nombre de cycles augmente, plus l'amplification non spécifique augmente.