Trzol (réactif total d'extraction d'ARN) (rouge)

Les produits de la société sont uniquement destinés à la recherche scientifique et ne doivent pas être utilisés pour le diagnostic clinique!

Présentation du produit: les réactifs trzol sont des réactifs qui extraient l'ARN total directement des cellules ou des tissus. Il maintient l'intégrité de l'ARN lors de la fragmentation et de la lyse des cellules. On centrifuge après addition de chloroforme et on sépare l'échantillon en une couche aqueuse et une couche organique. L'ARN est présent dans la couche aqueuse. Après collecte de la couche aqueuse ci - dessus, l'ARN peut être récupéré par précipitation dans l'isopropanol.

Qu'il s'agisse de tissus humains, animaux, végétaux ou bactériens, cette méthode permet une meilleure séparation des tissus et des cellules en petites et grandes quantités. La simplicité de fonctionnement du réactif trzol permet de traiter plusieurs échantillons simultanément. Toutes les opérations peuvent être effectuées en une heure. L'ARN total extrait par trzol permet d'éviter la contamination de l'ADN et des protéines. Il est donc possible de réaliser des analyses de transfert d'ARN, d'hybridation spot, de sélection Poly (A) +, de transcription in vitro, d'analyse de protection RNase et de clonage moléculaire.

Le réactif trzol favorise la libération de nombreux ARN de différentes tailles de poids moléculaire dans différents genres. Par exemple, l'ARN extrait du foie de rat est passé par électrophorèse sur gel d'agarose et coloré au bromure d'éthidium, et de nombreuses bandes discontinues de haut poids moléculaire (ARNm et composants de l'arnh) entre 7 KB et 15 KB sont visibles, deux Ribosomes dominants ~ 5 KB (28S) et ~ 2 KB (18s) et des ARN de bas poids moléculaire entre 0,1 et 0,3 KB (ARNt, 5S). Lorsque l'ARN extrait est dilué avec te, son rapport a 260 / a 280 est ≥ 1,8.

Stockage du produit: trzol est stable jusqu'à 12 mois à température ambiante. Néanmoins, pour de meilleurs résultats, nous recommandons de le conserver entre 2 et 8 ° c.

Quels réactifs et équipements doivent être utilisés pour la réaction PCR?

Réactifs:
ADN modèle: la réaction PCR nécessite un ADN modèle, tel que l'extraction de l'ADN des cellules, des tissus, du sang, etc.; Amorces: deux amorces de la réaction PCR, appariées respectivement aux deux extrémités de l'ADN modèle pour la région spécifique nécessaire à l'amplification, les amorces pouvant également être synthétisées en amorces utilisées dans des procédés tels que le clonage ta; DNTP: quatre dNTP sont nécessaires dans la réaction de PCR, y compris le désoxyadénylate (datp), le désoxythymidate (dctp), le désoxyguanylate (dgtp), le désoxycytidinate (dttp) pour les processus biologiques tels que la Division cellulaire, la synthèse de l'ADN, l'extension et l'expansion des brins d'ADN modèle amplifiés par PCR; Taq DNA polymérase: polymérase nécessaire à la réaction PCR, la Taq polymérase est généralement utilisée, il existe d'autres types de polymérases telles que Pfu, phusion, etc. pour l'amplification des brins d'ADN; Solution de buffer PCR: a un effet tampon sur la réaction PCR, ajuste le pH de la réaction, le thiosulfate SDS, les composés organiques à petites molécules tels que le formaldéhyde, peut améliorer la spécificité de la réaction PCR, améliorant ainsi l'efficacité de la réaction; Systèmes de coupure enzymatique: l'amplification par PCR implique souvent des étapes expérimentales telles que la recombinaison, la construction et le séquençage, nécessitant souvent des opérations de coupure enzymatique. Mark: une norme de poids moléculaire, un outil pour distinguer la taille des fragments d'ADN. Kit de purification de l'ADN: pour la purification des produits de la réaction PCR;
Équipement:
Instrument PCR: utilisé pour contrôler la température de réaction, garantissant un contrôle strict des différentes liaisons de température lors de la réaction PCR; Cuve d'électrophorèse: pour isoler les produits d'amplification PCR; Extracteur d'acides nucléiques: extraction entièrement automatique des acides nucléiques à partir d'échantillons de tissus. Ces réactifs et dispositifs sont utilisés dans les techniques de biologie moléculaire par PCR, et ce n'est que sur une base ordonnée et complète que la réaction de PCR peut être effectuée et que des résultats précis peuvent être obtenus.

Expériences fondamentales liées à la PCR:

La réaction en chaîne de la polymérase générale est composée de 20 à 35 cycles comprenant chacun les 3 étapes suivantes:

Un,Dénaturation:

L'ADN double brin a été isolé en utilisant des températures élevées (93 - 98 ° c). La température élevée interrompt la liaison hydrogène reliant les deux brins d'ADN. Avant le premier cycle, il est courant de chauffer pendant un certain temps pour assurer la séparation du gabarit et des amorces, qui ne sont présents que sous forme de chaîne unique. Cette étape dure 1 - 2 minutes, puis le PCR contrôle la température dans la phase de cycle.

II. Recuit ou assemblage, réplication:

Après séparation double brin de l'ADN, la température est abaissée de manière à ce que les amorces puissent se lier à l'ADN simple brin. La température à ce stade est généralement inférieure de 5°C au point de fusion des amorces. Une température de recuit incorrecte peut entraîner des amorces qui ne se lient pas au gabarit ou qui se lient incorrectement. Cette étape dure 1 - 2 minutes.

Iii. Extension:

L'ADN polymérase commence à synthétiser des brins complémentaires le long d'un brin d'ADN à partir d'amorces liées au refroidissement. La température à ce stade dépend de l'ADN polymérase. Ce temps d'étape dépend de la polymérase ainsi que de la longueur du fragment d'ADN à synthétiser. Le Taq traditionnel estime qu'il faut environ 40 secondes pour synthétiser 1000 pb / min, le TBR le plus récent (de thermophilus brockianus), et seulement 10 à 15 secondes pour la polymérase de fusion produite par les entreprises commerciales.

Optimisation des conditions de réaction PCR:

1, température et temps de dénaturation:

La déconditionnement de l'ADN modèle garanti est la clé pour garantir le succès de l'amplification PCR dans son ensemble. Chauffage 90 ~ 95 ° C, 30 ~ 60s, les molécules d'ADN re - complexes sont également variables en un seul brin. Des températures trop élevées ou trop longues peuvent endommager l'activité de l'enzyme Taq et la molécule dNTP.

2, température et temps de réplication:

La spécificité de l'amplification par PCR dépend de la liaison des amorces au gabarit lors de la Renaturation. Plus la température de Renaturation est élevée, plus la spécificité du produit est élevée. Plus la température de Renaturation est basse, plus la spécificité du produit est faible. Il doit être réglé spécifiquement en fonction de la valeur TM de l'amorce.

3, température et temps d'extension:

Généralement situé entre la température d'action optimale de l'enzyme Taq 70 ~ 75 ° c. Lorsque l'amorce est inférieure à 16 nucléotides, la température d'extension trop élevée n'est pas propice à la liaison de l'amorce au gabarit, peut être lentement chauffée à 70 ~ 75 ° c. le temps de réaction d'extension peut être déterminé par la longueur du fragment à amplifier, moins de 1 KB, 1 min est suffisant; Plus de 1KB nécessite un temps d'extension plus long. L'enzyme Taq peut augmenter le temps selon 1 KB / min. Il est à noter ici qu'une amplification non spécifique peut se produire avec des temps d'élongation trop longs. Il est donc nécessaire de définir la bonne durée d'extension.

4, nombre de cycles:

Une fois les autres paramètres sélectionnés, le nombre de cycles de PCR dépend principalement de la concentration en ADN modèle. En théorie, après 20 à 25 cycles, l'accumulation de produits PCR peut atteindre un maximum, en pratique, le rendement de la réaction par étape ne peut pas atteindre 100%, donc quelle que soit la concentration de matrice, 20 à 30 cycles est un nombre de cycles plus raisonnable. Plus le nombre de cycles augmente, plus l'amplification non spécifique augmente.

Produits vendus par la société:

TRzol(total ARN Réactifs d'extraction)( rouge ) et	Pandemic2009h1n1 virus de la grippe ha kit de détection des acides nucléiques	Cassette d'essai de contenu de coenzyme Ⅰ NAD (h) (méthode colorimétrique)
TRzol(total ARN Réactifs d'extraction)( incolore ) et	Kit de détection des acides nucléiques du gène ha du sous - type H3N2 du virus de la grippe saisonnière	NADKinase (NADK) boîte de test (méthode colorimétrique)
TRzol LS(échantillons liquides ARN Réactifs d'extraction)	Kit de détection des acides nucléiques du gène ha du virus de sous - type H7N9	Cassette de test de lactate déshydrogénase (LDH) (méthode colorimétrique)
ARNPure Total ultra pur ARN Kit d'extraction rapide (DNase I)	Kit de détection d'acides nucléiques du gène na du virus de sous - type H7N9	Cassette de test nad malate déshydrogénase (nadmdh) (méthode colorimétrique)
EASYspin Le sang total ARN Kit d'extraction rapide (DNase I)	Kit de détection des acides nucléiques du virus de la grippe B	Cassette de test NADP malate déshydrogénase (nadpmdh) (méthode colorimétrique)
EASYspin Organisation / Les cellules ARN Kit d'extraction rapide (DNase I)	Kit de détection des acides nucléiques de la lignée Yamagata du virus de la grippe B	Mitochondriale respiratoire chaîne complexe I / NADH coenzyme Q réductase test cassette (colorimétrie)
EASYspin plante ARN Kit d'extraction rapide (DNase I)	Kit de détection des acides nucléiques de la lignée Victoria du virus de la grippe B	Cassette de test NADH oxydase (NOx) (méthode colorimétrique)
PLANTaid plante ARN Aide au levage	Kit de détection des acides nucléiques pour la souche H7N9 mutante du virus (hpai - H7)	Cartouche de test de citrate synthase (CS) (méthode colorimétrique)
Génome du virus ADN/ARN Kit d'extraction rapide	Virus de la grippe saisonnière H1N1 sous - type ha kit de détection des acides nucléiques	Cassette d'essai de teneur en éthanol (méthode colorimétrique)
ARN propre ARN Kit de purification propre	Kit de détection des acides nucléiques du virus de la grippe C	éthanol déshydrogénase (ADH) boîte de test (méthode colorimétrique)
Fixeur d'ARN Sans azote liquide ARN Liquide de stockage des échantillons	Kit de détection des acides nucléiques pour le virus de la grippe aviaire porcine eurasiatique (EA - H1N1)	Cassette de test pour la formaldéhyde déshydrogénase (fdh) (méthode colorimétrique)
C'est sûr. efficace RNase Agent d'inactivation	Kit de détection des acides nucléiques pour virus de la grippe A / virus de la grippe B	Cassette de test pour l'Acétaldéhyde déshydrogénase (aldh) (méthode colorimétrique)
ARN long ARN Liquide de conservation à long terme	Kit de détection d'acides nucléiques pour virus de sous - type H7N9 / avec étalon interne	Coenzyme IINADP(H)Boîte de test de contenu (méthode colorimétrique)
RNase loin Puissance prête à l'emploi RNase Agent d'inactivation	Kit de détection d'acides nucléiques du sous - type H3N2 du virus de la grippe saisonnière	Cassette de test NADP Phosphatase (nadpase) (colorimétrie)