Inactivateur RNase haute efficacité rnasafe

Les produits de la société sont uniquement destinés à la recherche scientifique et ne doivent pas être utilisés pour le diagnostic clinique!

Conditions de conservation: - 20 ℃ conserver pendant plus d'une demi - année.

Introduction du produit:

Rnasafe contient plusieurs composés spéciaux qui inactivent la RNase et éliminent efficacement la RNase qui peut être présente dans diverses solutions ou tampons de réaction, empêchant ainsi la dégradation de l'ARN. Rnasafe peut être utilisé pour préparer des suspensions d'ARN et peut être ajouté aux réactifs de divers ARN (transcription in vitro, transcription inverse, RT - PCR, préparation de sondes, hybridation moléculaire, Nuclease Protection Assay, etc.). Inactiver les traces possibles de contamination RNase, maintenir la stabilité de l'ARN et obtenir de meilleurs résultats expérimentaux.

Caractéristiques du produit:

Convient à une variété de tampons, y compris les systèmes tampon tris et mops qui ne peuvent pas être traités par le DEPC.

2. Sûr et pratique pour enlever les traces de RNase dans la solution.

3. La solution traitée peut être retraitée à tout moment (60 ℃ 10 - 20 min) pour éliminer toute contamination RNase ultérieure qui pourrait survenir.

4. N'affecte pas l'activité de la transcriptase inverse, de l'ARN polymérase et de l'ADN polymérase résistant à la chaleur et peut être utilisé pour la transcription inverse et les réactions de transcription in vitro.

5. L'autoclave n'est pas nécessaire après le traitement.

Méthode d'utilisation:

1. Ce produit est un concentré de 20 × dilué 20 × rnasafe dans la solution générale ou le tampon de réaction à traiter jusqu'à une concentration de travail de 1 × à la concentration finale. Exemple: 5 µl de rnasafe peuvent être ajoutés à 95 µl de la solution à traiter.

Traitement à 60°C pendant 20 min pour inactiver la RNase. La solution après traitement par rnasafe est refroidie à température ambiante et prête à l'emploi. La solution traitée peut être reconditionnée (60°C 10 - 20 min) pour éliminer toute contamination par la RNase qui pourrait survenir lors du stockage. La solution est refroidie à température ambiante avant d'ajouter des préparations enzymatiques sensibles aux températures élevées telles que la transcriptase inverse.

la PCRQuels réactifs et équipements doivent être utilisés pour la réaction?

RéactifsPour:
modèleADNPour:la PCRModèle requis pour la réactionADNTels que l'extraction des cellules, des tissus, du sangADNEtc.; Amorces:la PCRDeux amorces de la réaction, respectivement avec le modèleADNLes deux extrémités de l'appariement des zones spécifiques nécessaires à l'amplification, les amorces peuvent également être synthétisées enTALes amorces utilisées dans des processus tels que le clonage;dNTPPour:la PCRQuatre sont nécessaires dans la réactiondNTP, y compris le désoxyadénylate (dATP), désoxythymidine (dCTP), désoxyguanylate (dGTP), acide désoxycytidinique (dTTP), pour la Division cellulaire,ADNProcessus biologiques tels que la synthèse, pourla PCRModèle pour l'amplificationADNExtension et amplification des chaînes;ADN de TaqPolymérase:la PCRPolymérases nécessaires à la réaction, utilisation généraleTaqPolymérases, il existe d'autres types de polymérases telles quePFUEt,PhusionEtc., pour l'amplificationADNLa chaîne;Tampon PCRSolution: Ouila PCRLa réaction a un effet tampon, régule la réactionLe pH, Hydrogénosulfate de thiosulfateSDS, de petites molécules de composés organiques tels que le formaldéhyde, peut renforcerla PCRSpécificité de la réaction et donc amélioration de l'efficacité de la réaction; Système de coupure enzymatique:la PCRL'amplification implique souvent des étapes expérimentales telles que la recombinaison, la construction et le séquençage et nécessite souvent des opérations de clivage enzymatique.MARQUE :Un critère de poids moléculaire pour discriminerADNOutil pour la taille des fragments.ADNKit de purification: pour la purificationla PCRLes produits de la réaction;
Équipement:
la PCRInstrumentation: pour contrôler la température de réaction, garantiela PCRContrôle strict des différents maillons de température lors de la réaction; Bain d'électrophorèse: pour la séparationla PCRProduits d'amplification; Extracteur d'acides nucléiques: extraction entièrement automatique des acides nucléiques à partir d'échantillons de tissus. Ces réactifs et équipements sontla PCRLes techniques de biologie moléculaire sont toutes, et ne peuvent être effectuées que sur une base ordonnée et complètela PCRRéagissez et obtenez des résultats précis.

la PCRExpériences fondamentales associées:

la PCRLes étapes de base de la réaction la réaction en chaîne de la polymérase générale est réalisée par20à35Composition en cycles, chaque cycle comprenant:3Une étape:

I. dénaturation:

Utilisation de hautes températures (93-98℃) faire double chaîneADNLa séparation. La température élevée reliera deux barresADNLa liaison hydrogène de la chaîne est interrompue. Avant le premier cycle, il est courant de chauffer pendant un certain temps pour assurer la séparation du gabarit et des amorces, qui ne sont présents que sous forme de chaîne unique. Le temps de cette étape1 - 2Minutes, suivantla PCRL'appareil contrôle la température dans la phase de cycle.

II. Recuit ou assemblage nominal,Reproductibilité:

DansADNAprès séparation de la double chaîne, la température est abaissée de manière à ce que les amorces puissent se lier à une seule chaîneADNEn haut. La température à ce stade est généralement inférieure au point de fusion des amorces5℃Une température de recuit incorrecte peut entraîner des amorces qui ne se lient pas au gabarit ou qui se lient incorrectement. Le temps de cette étape1 - 2Minutes.

Iii. Extension:

ADNLa polymérase commence le long des amorces qui se lient au refroidissementADNLa chaîne synthétise des chaînes complémentaires. La température à ce stade dépendADNPolymérase. Le temps de cette étape dépend de la polymérase ainsi que de ce qui doit être synthétiséADNLongueur du fragment. TraditionnelleTaqSynthèse estimée1000bp/min, plus récenteTbr(à partir de bactéries ThermophilesFièvre buccale) environ40Secondes, polymérases de fusion produites par des entreprises commerciales seulement environ10 à 15Secondes.

la PCROptimisation des conditions de réaction:

1, température et temps de dénaturation:

Modèle garantiADNLe désencombrement est la garantie de l'ensemblela PCRLa clé du succès de l'amplification. Chauffage90~95°C, 30~60sPlus complexe.ADNLes molécules sont également variables en une seule chaîne. La température est trop élevée ou la température élevée dure trop longtemps, peut êtreTaqActivité enzymatique etdNTPLes molécules causent des dommages.

2, température et temps de réplicationPour:

la PCRLa spécificité d'amplification dépend de la liaison de l'amorce au gabarit lors de la Renaturation. Plus la température de Renaturation est élevée, plus la spécificité du produit est élevée. Plus la température de Renaturation est basse, plus la spécificité du produit est faible. Selon les amorcesTmLa valeur est définie spécifiquement.

3, température et temps d'extensionPour:

Généralement situéTaqTempérature d'action optimale de l'enzyme70~75°CEntre. Les amorces sont inférieures à16Lorsqu'un nucléotide, une température d'extension trop élevée n'est pas propice à la liaison des amorces au gabarit et peut se réchauffer lentement jusqu'à70~75°C. Le temps de réaction prolongé, qui peut être fonction de la longueur du fragment à amplifier, est inférieur à1ko, 1minSuffisant; Supérieure à1 KoUn allongement du temps est nécessaire.TaqL'enzyme peut être basée sur1kb/minAugmenter le temps. Il est à noter ici qu'une amplification non spécifique peut se produire avec des temps d'élongation trop longs. Il est donc nécessaire de définir la bonne durée d'extension.

4Nombre de cyclesPour:

Une fois les autres paramètres sélectionnés,la PCRLe nombre de cycles dépend principalement du modèleADNLa concentration. Théoriquement parlant20〜25Après le cycle secondaire,la PCRL'accumulation du produit peut atteindre un maximum, impossible en pratique en raison du rendement de la réaction par étape100%, donc quelle que soit la concentration du gabarit,20 à 30Le nombre de cycles est plus raisonnable. Plus le nombre de cycles augmente, plus l'amplification non spécifique augmente.

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