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Trizol PAL extracteur d'acides nucléiques réactif chloroforme

NégociableMise à jour sur05/06

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Nature du fabricant: producteurs

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Vue d'ensemble

Trizol PAL extracteur d'acides nucléiques réactifs chloroformiques pour l'extraction d'ARN. Le trizol Pal (agent chloroformique substitué) peut être utilisé avec le trizol REAGENT (réf.: r1000) à la place du chloroforme, en effectuant des extractions répétées du système de lyse pour éliminer les protéines, et est polyvalent pour extraire l'ARN total d'échantillons de tissus animaux, de matériel végétal, de divers micro - organismes et de cellules de culture. L'échantillon est suffisamment clivé dans trizol tout en permettant une garantie maximale de l'intégrité de l'ARN.

Détails du produit

Trizol PAL chloroforme réactif pour l'extraction d'ARNNuméro de l'article: r1200

Condition de stockage: 0 - 30 ℃ protégé de la lumière

Trizol PAL chloroforme réactif pour l'extraction d'ARNDescription du produit:

Trizol PAL peut être utilisé avec trizol REAGENT (numéro de référence: r1000) au lieu du chloroforme, en effectuant des extractions répétées du système de lyse pour éliminer les protéines, et est polyvalent pour extraire l'ARN total d'échantillons de tissus animaux, de matériel végétal, de divers micro - organismes et de cellules de culture. L'échantillon est suffisamment clivé dans trizol tout en permettant une garantie maximale de l'intégrité de l'ARN. Après centrifugation par addition de trizol Pal, la solution est divisée en trois couches: une phase aqueuse incolore supérieure, une couche intermédiaire et une phase organique rouge inférieure, l'ARN étant réparti dans la couche supérieure de clearing. Une fois la couche supérieure collectée, l'ARN total peut être récupéré par précipitation dans l'isopropanol. L'ARN total extrait est bien intact, exempt de protéines et de contamination de l'ADN et peut être utilisé dans diverses expériences de routine en biologie moléculaire, telles que RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、 Traduction in vitro, etc.

Réactifs autonomes

Trizol REAGENT (réf.: r1000), alcool isopropylique, éthanol à 75%, eau sans RNase (nouvellement ouverte ou spécifique à l'ARN extrait)

Extracteur d'acides nucléiquesPrécautions:

1, la prévention de la contamination RNase, devrait prêter attention aux aspects suivants:

1) utilisez des produits en plastique sans RNase et des têtes de pistolet pour éviter la contamination croisée.

2) la verrerie doit être cuite à sec à haute température à 180 ℃ pendant 4h avant utilisation, les ustensiles en plastique peuvent être trempés dans NaOH 0,5 m pendant 10 minutes, autoclavés après rinçage à l'eau Chedi.

3) La solution de formulation doit utiliser de l'eau sans RNase.

4) L'opérateur porte un Masque jetable et des gants, changer les gants fréquemment pendant l'expérience.

2, l'échantillon extrait évite la congélation et la dégel répétées, sinon affecte le taux d'extraction d'ARN et la qualité.

3, cet article doit porter des articles de protection tels que des gants, des masques oculaires, des masques faciaux, etc. lors de l'utilisation de cet article. En cas de contact accidentel avec les yeux, ils doivent être immédiatement rincés avec beaucoup d'eau et transportés à l'hôpital pour un traitement. Tenir à l'écart du feu et des sources de chaleur lors de l'utilisation.

3, la préservation de l'ARN précipité dans l'éthanol à 75%, 2 - 8 ℃ peut être conservé pendant une semaine, - 20 ℃ conditions peuvent être conservés pendant 1 an.

La demi - vie de l'ARN est relativement courte et facile à dégrader, il est recommandé d'effectuer des expériences de suivi dès que possible après l'extraction, telles que la transcription inverse en adnc, Northern Blot, etc.

Si les expériences en aval sont très sensibles à l'ADN, il est recommandé de traiter l'ARN avec de la DNase I sans RNase.

Étapes opérationnelles:

Traitement de divers matériaux.

1.1 tissus végétaux: prendre des tissus végétaux frais pour broyer suffisamment dans l'azote liquide ou broyer rapidement dans trizol directement après le cisaillement du Groupe de plantes Zhi, ajouter 1 ml de trizol par 30 - 50 mg de tissu, mélanger.

Remarque: le volume de l'échantillon ne doit généralement pas dépasser 10% du volume de trizol.

1.2 tissus animaux: prélever des tissus animaux frais ou congelés à - 70 ° C pour les couper le plus possible, ajouter 1 ml de trizol par 30 - 50 mg de tissu, homogénateur pour homogénater. Ou mélanger en ajoutant 1 ml de trizol après broyage dans de l'azote liquide.

Remarque: le volume de l'échantillon ne doit généralement pas dépasser 10% du volume de trizol.

1.3 cellules en culture monocouche: le liquide de culture est aspiré et la quantité appropriée de trizol peut être ajoutée directement dans la plaque de culture (1 ml de trizol est nécessaire pour 10 CM2 de surface), les cellules sont lysées par soufflage répété à l'aide d'un échantillonneur. Également disponible après traitement par la Bai - enzyme pancréatique, la solution cellulaire est transférée dans un tube à centrifuger de RNase - free, centrifugée à 300 x G pendant 5 min, le précipité cellulaire est recueilli, tout le surnageant est soigneusement aspiré, trizol est ajouté 1 mL pour le mélange.

Remarque: 1) Le nombre de cellules collectées ne doit pas dépasser 1 × 10 7.

2) L'addition de trnzol est déterminée en fonction de la surface de la plaque de culture et n'est pas déterminée par le nombre de cellules. Si l'addition de trizol est insuffisante, cela peut entraîner une contamination de l'ADN dans l'ARN extrait.

3) lors de la collecte des cellules, assurez - vous d'enlever le liquide de culture cellulaire propre, sinon il entraînera une lyse incomplète, entraînant une diminution de la production d'ARN.

1.4 suspension cellulaire: les cellules sont collectées par centrifugation. Ajouter 1 ml de trizol par 5 × 10 6 - 1 × 10 7 cellules animales, végétales et de levure ou par 10 7 cellules bactériennes.

Remarque: 1) ne pas laver les cellules avant d'ajouter trizol afin de ne pas dégrader l'ARN.

2) certaines cellules de levure et de bactéries peuvent nécessiter un homogénateur ou un traitement de broyage à l'azote liquide.

1.5 traitement du sang: prendre directement du sang frais, ajouter 3 fois le volume de trizol (0,25 ml de sang total recommandé pour ajouter 0,75 ml de trizol), bien agiter et mélanger.

1.6 Étapes optionnelles: pour les échantillons riches en protéines, en graisses, en Polysaccharides ou en substances extracellulaires, tels que les tissus musculaires, les tissus adipeux ou les tubercules de plantes, les insolubles peuvent être centrifugés pendant 10 minutes à 12 000 tr / MIN (~ 13 400 × g) à 4 °C après le traitement de L'homogénat, lorsque le précipité contient du matériel extracellulaire, des polysaccharides et de l'ADN de haut poids moléculaire, tandis que l'ARN est présent dans le surnageant.

2, après l'ajout de trizol dans l'échantillon soufflé plusieurs fois à plusieurs reprises, de sorte que l'échantillon est suffisamment clivé. Laisser reposer à température ambiante pendant 5 minutes pour que la séparation Quan du complexe protéine - acide nucléique soit complète.

3, ajouter trizol PAL à la solution ci - dessus, ajouter 0,2 ml de trizol PAL pour chaque utilisation de 1 ml de trizol, couvrir le couvercle du tube, osciller vigoureusement pendant 15 secondes, laisser la température ambiante pendant 2 - 3 minutes.

4, 4 ℃ 12 000 RPM centrifuger pendant 15 minutes, lorsque l'échantillon est divisé en trois couches: la phase organique rouge, la couche intermédiaire et la phase aqueuse incolore supérieure, l'ARN est principalement dans la phase aqueuse, transférer la phase aqueuse (environ 600 UL) dans un nouveau tube de centrifugation RNase - Free (auto - alimenté).

5, ajouter un volume égal d'alcool isopropylique dans la solution de phase aqueuse résultante, mélanger à l'envers et laisser à température ambiante pendant 10 minutes.

6, 4 ℃ 12 000 RPM centrifuger pendant 10 minutes et jeter sur le nettoyage.

7, le précipité est lavé par addition d'éthanol à 75% (formulé avec de l'eau sans RNase). Le précipité est lavé par 1 mL d'éthanol à 75% pour 1 ml de trizol utilisé.

8, 4 ℃ 12 000 RPM centrifuger pendant 3 minutes, soigneusement aspirer le déblaiement, faire attention à ne pas aspirer le précipité d'ARN.

Remarque: la petite quantité restante de liquide peut être brièvement centrifugée, puis aspirée avec la tête du pistolet, en prenant soin de ne pas rejeter le précipité.

9, laissez la température ambiante pendant 2 - 3 minutes, laissez sécher. Ajouter 30 - 100 µl d'eau sans RNase et dissoudre suffisamment l'ARN, l'ARN résultant est conservé à - 70 ° C, empêchant la dégradation.

Remarque: le précipité ne doit pas sécher trop pour ne pas être difficile à dissoudre.

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