Acétyldan estérase alcaline (AchE) etDescription du kit de détermination de l'activité

Méthode des traces 100T/96S

Toujours prendre avant la détermination officielle 2 - 3 Un échantillon avec de grandes différences attendues fait des prédictionsDétermination de la signification:

AchE Appartient à l'hydrolase acide de soie, largement présente dans divers tissus animaux et sérums.AchE Base catalytique acétyldan (Ach) etHydrolyse, dansJoue un rôle important dans la régulation de la conduction nerveuse.

Principe de détermination:

AchECatalyseAchHydrolyse pour donner Dan base, Dan base avec acide disulfure P - nitrobenzoïque(DTNB) etGénération d'action 5 -Mercapto-Acide nitrobenzoïque(TNB) et; TNBDans 412 nmIl y a un pic d'absorption, déterminé par de 412 nmTaux d'augmentation de l'Absorbance, calculé AchEActivité.

Kit de détermination de l'activité de l'acétyldan - alcali estérase série P450

Composition:

Réactif III: poudre× 1 Branches,4℃Préserver. Adhérer avant utilisation 1.3 ml Réactif deux, dissolution suffisante de commotion.Réactif IV: poudre× 1 Branches,4℃Préserver. Adhérer avant utilisation 1.3 ml Réactif deux, dissolution suffisante de commotion.

Les paramètres du produit spécifique sont soumis aux paramètres de la description du produit reçu

Instruments et fournitures propres:

Spectrophotomètre visible/Marqueur enzymatique, cuvette colorimétrique à traces de quartz/ 96 Plaque perforée, centrifugeuse cryogénique, bain - Marie, pistolet à pipette réglable et eau distillée.

Enzymes grossièresExtraction liquidePour:

1. Organisation: selon la qualité de l'Organisation (g): un volume de réactif(ml)pour 1Pour:5 à 10Proportion (Recommander de prendre rendez - vous 0.1gOrganisation, adhérer 1 mlRéactifsI) Effectuer un homogénat de bain de glace,8000g à 4 ℃Centrifugation 10 minutesPrélever le surnageant à mesurer.

2. Bactéries, champignons: par nombre de cellules (10⁴ One): un volume de réactif (ml) etpour 500 ~ 1000Pour:1 Proportion (conseil 500 Millions de cellules plusEntrer 1 ml Réactif un),Bain de glace ultrasons briser les cellules (puissance 300w, ultrasons 3 Secondes, intervalles 7 Secondes, temps total 3 minutes) et; puis 8000g, 4℃, centrifugation 10 minutesPrendre sur la glace à mesurer.

3. Liquides tels que le sérum: détermination directe.

Opération de détermination:

1. Spectrophotomètre/Préchauffage de l'étalon enzymatique 30 min, régule la longueur d'onde à 412 nmL'eau distillée est mise à zéro.

2. Réactif deux placé 37℃Préchauffage au bain - Marie 30 minutes- Oui.

3. Prendre une petite quantité de quartz colorimètre/ 96 Plaque de trou, à ajouter à son tour 20 μlLe surnageant,160 μlRéactif II,10 μl Réactif III et 10 μlRéactif quatre, mélange rapideBien, à412 nm Détermination en place3 minutes Variation de la valeur de l'absorption lumineuse interne, art.10 ans La valeur d'absorption lumineuse est notée commeA1， 第190s La valeur d'absorption lumineuse est notée commeA2- Oui.△A Tube de détermination= A2-A1- Oui. AchECalcul de l'activité:

a.La formule de calcul pour la détermination à l'aide d'une boîte colorimétrique de quartz à l'état de traces est la suivante:

1. OrganisationAchE Activité

（1）Calculé selon la concentration en protéines

Définition de l'unité d'activité: production catalytique par milligramme de protéine par minute 1nmol TNB La quantité d'enzyme est 1 Une unité enzymatique vivante.

AchE Activité enzymatique(nmol/min/mg) prot) = (△A ÷ε÷d×V Anti - Total× 10⁹) ÷(CPR × V L'échantillon) et÷T

= 245 ×△A ÷ Cpr

（2）Calculé selon la qualité de l'échantillon

Définition de l'unité d'activité: produite catalytiquement par gramme de tissu par minute 1nmol TNB La quantité d'enzyme est 1 Une unité enzymatique vivante.

AchE Activité enzymatique(nmol/min/g) Poids frais) = (△A ÷ε÷d×V Anti - Total× 10⁹) ÷(W × V L'échantillon÷V Total des échantillons) et÷T

=245 ×△A ÷ W

2. Bactéries, cellulesAchE Activité

Définition des unités actives: par 10⁴ Production catalytique de cellules par minute 1nmol TNB La quantité d'enzyme est 1 Une unité enzymatique vivante.

AchE Activité enzymatique(nmol/min/10)⁴ cellule) = (△A ÷ε÷d×V Anti - Total× 10⁹) ÷(nombre de cellules× V L'échantillon÷V Total des échantillons) et÷T

=245 ×△A ÷Nombre de cellules

3. sérumAchE Activité

Définition de l'unité d'activité: production catalytique par minute par ml de sérum 1nmol TNB La quantité d'enzyme est 1 Une unité enzymatique vivante.

AchE Activité enzymatique(nmol/min) /ml) = (△A ÷ε÷d×V Anti - Total× 10⁹÷V L'échantillon÷T

= 245 ×△A

εPour:TNBCoefficient d'extinction molaire,13,6 × 10³ L/mol/cm;d: diamètre optique de la cuve colorimétrique,3 cm;VTotal inverse: volume total du système réactionnel (L), 200 μl = 2 × 10^-4L;V échantillon total: volume de liquide extrait,1 ml;10⁶Pour:1 mol = 1 × 10⁶μmol;CPR: concentration en protéines (mg/ml);V Exemple: ajouter le volume de surnageant (ml),0.02 ml;W : qualité de l'échantillon;T: temps de réaction (min),3 minutes- Oui.

b.utiliser 96 La formule de calcul pour la détermination de la plaque à trous est la suivante:

1. OrganisationAchE Activité

（1）Calculé selon la concentration en protéines

Définition de l'unité d'activité: production catalytique par milligramme de protéine par minute 1nmol TNB La quantité d'enzyme est 1 Une unité enzymatique vivante.

AchE Activité enzymatique(nmol/min/mg) prot) = (△A ÷ε÷d×V Anti - Total× 10⁹) ÷(CPR × V L'échantillon) et÷T

= 490 ×△A ÷ Cpr

（2）Calculé selon la qualité de l'échantillon

Définition de l'unité d'activité: produite catalytiquement par gramme de tissu par minute 1nmol TNB La quantité d'enzyme est 1 Une unité enzymatique vivante.

AchE Activité enzymatique(nmol/min/g) Poids frais) = (△A ÷ε÷d×V Anti - Total× 10⁹) ÷(W × V L'échantillon÷V Total des échantillons) et÷T

= 490 ×△A ÷ W

2. Bactéries, cellulesAchE Activité

Définition des unités actives: par 10⁴ Production catalytique de cellules par minute 1nmol TNB La quantité d'enzyme est 1 Une unité enzymatique vivante.

AchE Activité enzymatique(nmol/min/10)⁴ cellule) = (△A ÷ε÷d×V Anti - Total× 10⁹) ÷(nombre de cellules× V L'échantillon÷V Total des échantillons) et÷T

=490 ×△A ÷Nombre de cellules

3. sérumAchE Activité

Définition de l'unité d'activité: production catalytique par minute par ml de sérum 1nmol TNB La quantité d'enzyme est 1 Une unité enzymatique vivante.

AchE Activité enzymatique(nmol/min) /ml) = (△A ÷ε÷d×V Anti - Total× 10⁹÷V L'échantillon÷T

= 490 ×△A

εPour:TNB Coefficient d'extinction molaire,13,6 × 10³ L/mol/cm;dPour:96 Diamètre optique de la plaque de trou,0.5 en cm;V Total inverse: volume total du système réactionnel (L), 200 μl = 2 × 10^-4L;Véchantillon total: volume de liquide extrait,1 ml;10⁶Pour:1 mol = 1 × 10⁶μmol;CPR: concentration en protéines (mg/ml);VExemple: ajouter le volume de surnageant (ml),0.02 ml;W : qualité de l'échantillon;T: temps de réaction (min),3 minutes- Oui.

Kit de détermination de l'activité de l'acétyldan - alcali estérase série P450