Su - N - déméthylase de moisissure Rouge (ernd)Description du kit de détermination de l'activité

Méthode des traces 100T/48S

Toujours prendre avant la détermination officielle 2 - 3 Un échantillon avec de grandes différences attendues fait des prédictionsDétermination de la signification:

Cytochrome P450 Les enzymes sont un groupe de lignées enzymatiques présentes principalement dans le foie, dans le métabolisme des substances exogènes, en particulier le métabolisme des médicaments et des poisons, avecIl y a un rôle important. ERND DansP450 Équivalent en lignée enzymatiqueCYP2B Sous - type, étroitement lié à la déméthylation du métabolisme du médicament. CYP2B AvecCatalyser la formation de substrats métaboliques inactifs qui sont facilement excrétés tout en ayant un effet détoxifiant, peut également permettre à certains médicaments de traverserActivation métabolique du cyp2b.

Principe de détermination:

ERNDLibération catalytique de formaldéhyde par la moisissure rouge su, parDétermination colorimétrique Nash de la teneur en formaldéhyde, peut être calculée ERND 活性。

Kit de détermination de l'activité Su - N - déméthylase de moisissure rouge série P450

Composition:

Réactif I: poudre × 1 Bouteilles, 4℃ conservation. Avant utilisation plus100 ml L'eau distillée se dissout.

Réactif III: poudre × 1 tube, 4℃ conservation. Avant utilisation plus1 mL d'eau distillée, bien dissous.Réactif IV: poudre × 1 Bouteilles, 4℃ conservation. Avant utilisation plus0,5 ml Eau distillée, bien dissoute.Réactif V: poudre × 1 Bouteilles, 4℃ conservation. Avant utilisation, ajouter de l'eau distillée4,5 ML pour bien dissoudre.

Liquide Standard: liquide × 1 Bouteilles, - 20℃ conservation. Prendre avant utilisation1,5 ml EP Tube, rejoindre 10 μlLiquide standard, plus 990 µl d'eau distillée, soit 0,05 mmol / l en mélangeSolution standard de Jia - aldéhyde, 4℃保存。

Les paramètres du produit spécifique sont soumis aux paramètres de la description du produit reçu

Instruments et fournitures propres:

Centrifugeuse ordinaire, centrifugeuse ultra - rapide, pistolet à pipette réglable, spectrophotomètre visible / étalon enzymatique, microcylindre de quartz / 96 Plaque à trous, distillationEau et glace.

Extraction du liquide enzymatique brut:

1,Élimination des noyaux cellulaires, des mitochondries et autres substances macromoléculaires:Appeler environ 0.5g Organisation, adhérer 1 ml Réactif I, bien broyé sur glace, 10 000g 4℃ à partir deCœur 30min， Prélever le surnageant et transférer dans le tube d'ultracentrifugation.

2,Microsomes bruts:100 000g，4℃, centrifugation60min， Jeter le surnageant.

3,Élimination des impuretés telles que l'hémoglobine:Vers les étapes 2 Addition au précipité 1 mlRéactif un, dissout bien après le couvercle serré, 100000gCentrifugation 30min， Abandonner

Le surnageant.

4,Microsomes finaux:Vers les étapes 3 Précipitation du réactif II 0.5ml， Dissolution commotionnelle adéquate, c'est - à - dire liquide enzymatique brut, à mesurer. Ce liquide à mesurer doit être utilisé le jour même.

Opération de détermination:

1. Spectrophotomètre /Préchauffage de l'étalon enzymatique 30 minutes, régule la longueur d'onde à 412 nm， L'eau distillée est mise à zéro.

2. Réactif deux placé 37℃ préchauffage dans le bain d'eau30 minutes- Oui.

3. Aux soins:取 0,5 ml EP Tube, rejoindre10 μl Liquide enzymatique brut, 170 μl Réactif II, 10 μl Réactif III, 10 μl Eau distillée, après mélange placée37℃Isolation du bain d'eau 30 minutes; adhérer maintenant 35 μlRéactif cinq, après mélange placé dans un bain de glace 5 minutes ; 取出Adhérer après 35 μl de réactif six, température ambiante après mélange

Laisser reposer 5 minutes; température ambiante 8000rpmCentrifugation 5min； Prenez un nouvel EPTube, rejoindre 100 μl Surnageant, 100 μl Réactif sept, après mélange Bain d'eau à 60°C10min， Puis retirez, refroidi avec de l'eau froide 5 minutes, à 412 nmDétermination de l'absorption lumineuse, notéeA aux soins.

4. Tube de détermination:取 0,5 ml EP Tube, rejoindre10 μl Liquide enzymatique brut, 170 μl Réactif II, 10 μl Réactif III, 10 μl Réactif quatre, après mélange placé37℃

Isolation du bain d'eau 30 minutes; adhérer maintenant 35 μlRéactif cinq, après mélange placé dans un bain de glace5 minutes ; 取出Adhérer après 35 μl de réactif six, température ambiante après mélangeLaisser reposer 5 mètresin; température ambiante 8000rpmCentrifugation 5 mètresdans; prendre nouveau EPTube, rejoindre 100 μl de surnageant,100 μl Réactif sept, après mélange 60℃ bain d'eau10min， Puis retirez, refroidi avec de l'eau froide 5 minutes, à 412 nmDétermination de l'absorption lumineuse, notéeA tube de détermination.

5. Tube Standard:取 0,5 ml EPTube, rejoindre 100 μlStandard, 100 μl Réactif sept, après mélange 60℃ bain d'eau10min， Puis retiré,Avec le froid

Refroidissement par eau 5 minutes, à 412 nm Détermination de l'absorption lumineuse, notéeA Tubes Standard.

Remarque: chaque échantillon doit être pris en charge.

ERND Formule de calcul de l'activité:

a.La formule de calcul pour la détermination à l'aide d'une boîte colorimétrique de quartz à l'état de traces est la suivante:

(1).Calculé selon la concentration en protéinesPour:

Définition des unités actives: 371 nmol par milligramme de protéine catalysée par minute à ℃Le formaldéhyde est 1 unité enzymatique vivante.

ERND Activité (nmol / MIN / mgprot) = C Produits standard × V Produits standard×(A) Tube de détermination - a Soins aux) et÷A Tube standard × multiple de dilution÷(Cpr × V)

L'échantillon÷T

=45 fois (A) Tube de détermination - a Soins) ÷ a Tubes Standard ÷ CPR- Oui.

(2).Calculé selon la qualité de l'échantillonPour:

Définition des unités actives: 37À ℃, 1 nmol est produit catalytiquement par gramme d'échantillon par minuteLe formaldéhyde est 1 unité enzymatique vivante.

ERND Activité (nmol / MIN / G Poids frais) = C Produits standard × V Standard × (A Tube de détermination - a Soins) ÷ a Tube standard × multiple de dilution ÷ (échantillon W × v) ÷ t

=45 fois (A) Tube de détermination - a Soins) ÷ a Tubes Standard÷W

CProduit standard: 0.05mmol/L = 50 μmol/L; VStandard: 100 μl = 1 × 10^-4 L; multiple de dilution: vTotal inverse ÷ V Surnageant = (50 + 850)

+ 50 + 50 + 175 + 175) ÷ 500 = 2,7; CPR: concentration protéique du liquide enzymatique brut (mg / ML), nécessite une détermination supplémentaire, il est recommandé d'utiliser cette sociétéBCA

Kit de détermination de la teneur en protéines; W: qualité de l'échantillon, g；V Échantillon: volume de liquide enzymatique brut ajouté, 10 µl = 0,01 ml; T: temps de réaction catalytique(M)dans) et,

30 minutes- Oui.

b.utiliser La formule de calcul pour la détermination de la plaque à 96 puits est la suivante:

(1).Calculé selon la concentration en protéinesPour:

Définition des unités actives: 371 nmol par milligramme de protéine catalysée par minute à ℃Le formaldéhyde est 1 unité enzymatique vivante.

ERND Activité (nmol / MIN / mgprot) = C Produits standard × VProduits standard×(A) Tube de détermination - a Soins aux) et÷A Tube standard × multiple de dilution÷(Cpr × V)

L'échantillon÷T

=45 fois (A) Tube de détermination - a Soins) ÷ a Tubes Standard ÷ CPR- Oui.

(2).Calculé selon la qualité de l'échantillonPour:

Définition des unités actives: 37À ℃, 1 nmol est produit catalytiquement par gramme d'échantillon par minuteLe formaldéhyde est 1 unité enzymatique vivante.

ERND Activité (nmol / MIN / G Poids frais) = C Produits standard × V Standard × (A Tube de détermination - a Soins) ÷ a Tube standard × multiple de dilution ÷ (échantillon W × v) ÷ t

=45 fois (A) Tube de détermination - a Soins) ÷ a Tubes Standard÷W

CProduit standard: 0.05mmol/L = 50 μmol/L; VStandard: 100 μl = 1 × 10^-4 L; multiple de dilution: vTotal inverse ÷ V Surnageant = (50 + 850)

+ 50 + 50 + 175 + 175) ÷ 500 = 2,7; CPR: concentration protéique du liquide enzymatique brut (mg / ML), nécessite une détermination supplémentaire, il est recommandé d'utiliser cette société BCAKit de détermination de la teneur en protéines; W: qualité de l'échantillon, g；V Échantillon: volume de liquide enzymatique brut ajouté, 10 µl = 0,01 ml;T: temps de réaction catalytique(M)in) et, 30 minutes.

Kit de détermination de l'activité Su - N - déméthylase de moisissure rouge série P450