CytochromesB5(Cytochrome B5) etDescription du kit de détermination du contenu

Méthode des traces 100T/96S

Toujours prendre avant la détermination officielle 2 - 3 Un échantillon avec de grandes différences attendues fait des prédictionsDétermination de la signification:

CytochromesP450 Les enzymes sont un groupe d'Isoenzymes présentes principalement dans le foie et jouent un rôle important dans le métabolisme des substances exogènes, en particulier les médicaments etMétabolisme des poisons. Cytochromes P450 Et cytochromesB5 OuiP450 Deux protéines d'hémoglobine de la lignée enzymatique, dont le rapport varie avec P450 Merci de vivreLe sexe est étroitement lié.

Principe de détermination:

Cytochromes oxydés B5 Après la réduction de Lian Diana *, dans 424 nm Il y a un pic d'absorption maximal, déterminé par 424 nm et 490 nm Différence de la valeur d'absorption de la lumière, peut être calculéesortirCytochromesB5Le contenu.

Kit de détermination du contenu en cytochrome B5 série P450

Composition:

Réactif 1: poudre× 2 Les bouteilles,4℃Préserver. Avant utilisation 100 ml Eau distillée, bien dissoute.

Formulation du liquide de travail:

Formulé avant utilisation, porter des gants jetables, ouvrir soigneusement le bouchon de trois flacons de réactif, ajouter deux 20 ml Suffisamment dissous,4℃Protégé de la lumière pour préserver 1 Semaine.

Les paramètres du produit spécifique sont soumis aux paramètres de la description du produit reçu

Instruments et fournitures propres:

Centrifugeuse ordinaire, centrifugeuse ultra - rapide, pistolet à pipette réglable, Spectrophotomètre UV/Étalonneur enzymatique, boîte colorimétrique en verre à l'état de traces/ 96 Plaque à trous, et à la vapeurEau distillée.

Cytochromes dans les échantillons B5 ExtractionPour:

1、Élimination des noyaux cellulaires, des mitochondries et autres substances macromoléculaires:Appeler environ 0.5g Organisation, adhérer 1 ml Réactif un, bien broyé sur la glace,10 000g 4℃Loin deCœur 30 minutes, prenez le surnageant et Transférez - le dans le tube d'ultracentrifugation.

2、Microsomes bruts:100 000g,4℃Centrifugation 60 minutesJeter le surnageant.

3、Élimination des impuretés telles que l'hémoglobine:Vers les étapes 2 Addition au précipité 1 ml Réactif un, après le couvercle serré bien commotionné dissous,100 000g Centrifugation 30 minutes, abandonnerLe surnageant.

4、Liquide à mesurer:Vers les étapes 3 Précipitation du réactif II 0,5 ml, couvercle serré après une dissolution suffisante commotion, c'est - à - dire à mesurer le liquide, qui doit être déterminé le jour même.

Cytochromes B5 Opération de détermination du contenu:

1. Spectrophotomètre/Préchauffage de l'étalon enzymatique 30 min- Oui.

2. Liquide de travail placé 25℃Préchauffage au bain - Marie 30 min- Oui.

3. Tube vide:取 1 ml Verrerie colorimétrique, ajouter 10 μl Eau distillée,200 μl Liquide de travail, à température ambiante 2 min,424 nm et 490 nm Aspiration à l'endroitValeur de la lumière,424 nm La valeur d'absorption de lumière est notéeA Tube vide 1,490 nm La valeur d'absorption de lumière est notéeA Tube vide 2- Oui.△A Tube vide=A Tube vide 1-A VideTube blanc 2

4. Tube de détermination:取 1 ml Verrerie colorimétrique, ajouter 10 μl Liquide à mesurer,200 μl Liquide de travail, à température ambiante 2 min,424 nm et 490 nm Aspiration à l'endroitValeur de la lumière,424 nm La valeur d'absorption de lumière est notéeA Tube de détermination 1,490 nm La valeur d'absorption de lumière est notéeA Tube de détermination 2- Oui.

△A Tube de détermination=A Tube de détermination 1-A Tube de détermination 2- Oui.

Attention: il suffit de faire un tube vide.

Cytochrome de l'échantillon B5 Formule de calcul du contenu:

a.La formule de calcul pour la détermination à l'aide d'une boîte colorimétrique de quartz à l'état de traces est la suivante:

（1）Calculé par concentration en protéines

CytochromesB5 Contenu(nmol/mg) prot) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷(ε×d) ×V Anti - Total÷(Cpr × V L'échantillon) et

=122,8 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷Cpr

（2）Calculé par qualité d'échantillon

CytochromesB5 Contenu (nmol/g Poids frais)= (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷(ε×d) ×V Anti - Total×(V Total des échantillons÷V L'échantillon) et÷W

=61,4 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷W

ε: cytochrome réduitB5 Coefficient d'extinction nanomolaire,171 × 10^-6 L/nmol/cm;d: diamètre optique de la boîte colorimétrique (en cm),1 cm; V Anti - Total: volume total du système réactionnel,210 μl = 2,1 x 10^-4 L;CPR: concentration en protéines à mesurer (mg/ml), nécessitant une détermination supplémentaire;Véchantillon: volume de liquide à mesurer ajouté au système réactionnel,10 μl = 0,01 ml;Véchantillon total: volume total de liquide à mesurer,0,5 ml;W: qualité de l'échantillon (g).

b.utiliser 96 La formule de calcul pour la détermination de la plaque à trous est la suivante:

（1）Calculé par concentration en protéines

CytochromesB5 Contenu(nmol/mg) prot) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷(ε×d) ×V Anti - Total÷(Cpr × V L'échantillon) et

=245,6 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷Cpr

（2）Calculé par qualité d'échantillon

CytochromesB5 Contenu (nmol/g Poids frais)= (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷(ε×d) ×V Anti - Total×(V Total des échantillons÷V L'échantillon) et÷W

=122,8 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷W

ε: cytochrome réduitB5 Coefficient d'extinction nanomolaire,171 × 10^-6 L/nmol/cm;dPour:96 Diamètre optique de la plaque de trou (en cm),0,5 cm; V Anti - Total: volume total du système réactionnel,210 μl = 2,1 x 10^-4 L;CPR: concentration en protéines à mesurer (mg/ml), nécessitant une détermination supplémentaire;Véchantillon: volume de liquide à mesurer ajouté au système réactionnel,10 μl = 0,01 ml;Véchantillon total: volume total de liquide à mesurer,0,5 ml;W: qualité de l'échantillon (g).

Kit de détermination du contenu en cytochrome B5 série P450