Phosphatase alcaline (AKP/ALP) etDescription du kit de détermination de l'activité

Méthode des traces 100T/48S

Toujours prendre avant la détermination officielle 2 - 3 Un échantillon avec de grandes différences attendues fait des prédictionsDétermination de la signification:

AKP/ALP Est une glycoprotéine contenant du zinc qui hydrolyse divers composés monoesters de Phospholipides naturels et synthétiques dans un environnement alcalin.

AKP/ALP Largement distribué dans divers organes du corps humain, principalement le foie.

Principe de détermination:

Dans un environnement alcalin,AKP/ALP Catalyse la formation de phénols libres par le phosphate de phénylène disodique; Phénols et 4 -Aminoantibiline et ferricyanhua Potassium réaction rouge SubDérivés de quinone, dans 510 nmAbsorption lumineuse caractéristique; Par détermination 510 nmTaux d'augmentation de l'Absorbance pour calculerAKPActivité.

Kit de détermination de l'activité de la phosphatase alcaline estérase Series

Composition:

Réactif IV: liquide× 1 Les bouteilles,4℃Conserver à l'abri de la lumière, ne pas devenir bleu - Vert avant d'utiliser. Standard: liquide× 1 Branche (EP Dans le tube),2 μmol/ml Liquide standard phénolique,4℃Préserver.

Instruments et fournitures propres:

Spectrophotomètre visible/Marqueur enzymatique, cuvette colorimétrique à traces de quartz/ 96 Plaque perforée, centrifugeuse de table, bain - Marie, pipette réglable et eau distillée.

Les paramètres du produit spécifique sont soumis aux paramètres de la description du produit reçu

Extraction du liquide enzymatique brut:

1. Organisation: selon la qualité de l'Organisation (g): un volume de réactif(ml)pour 1Pour:5 à 10Proportion (Recommander de prendre rendez - vous 0.1gOrganisation, adhérer 1 mlRéactifsI) Effectuer un homogénat de bain de glace,4℃Et,8000gCentrifugation 10 minutesPrélever le surnageant à mesurer.

2. Bactéries ou cellules: par nombre de bactéries ou de cellules (104 One): un volume de réactif (ml) etpour 500 ~ 1000Pour:1 Proportion (conseil 500 dix milleAjout de cellules 1 mlRéactif i), bain de glace pour briser les cellules par ultrasons (puissance 300w, ultrasons 3 Secondes, intervalles 7 Secondes, temps total 3 minutes);puis 8000g,4℃, centrifugation 10 minutesPrendre sur la glace à mesurer.

3. Le sang peut être déterminé directement ou après dilution appropriée.

Étapes de détermination:

1. Spectrophotomètre/Préchauffage de l'étalon enzymatique 30 minutes, régule la longueur d'onde à 510 nmL'eau distillée est mise à zéro.

2. Réactif trois placé 37℃Préchauffage au bain - Marie 30 min- Oui.

3. Tube vide:取EP Tube, rejoindre 4 μl Eau distillée,40 μl Réactif deux,40 μl Réactif trois, après mélange placé 37℃Isolation au bain - Marie 15 minutes;Ajouter le réactif IV 120 μlAprès mélange à 510 nmDétermination de l'Absorbance, notéeATube vide.

4. Tube Standard:取EP Tube, rejoindre 4 μl Standard,40 μl Réactif deux,40 μl Réactif trois, après mélange placé 37℃Isolation au bain - Marie 15 minutes;

Ajouter le réactif IV 120 μlAprès mélange à 510 nm Détermination de l'Absorbance, notéeA Tubes Standard.

5. Aux soins:取EP Tube, rejoindre 4 μl Le surnageant,40 μl Eau distillée,40 μl Réactif trois, après mélange placé 37℃Isolation au bain - Marie 15 minutes;Ajouter le réactif IV 120 μlAprès mélange à 510 nmDétermination de l'Absorbance, notéeADéterminer le tube.

6. Tube de détermination:取EP Tube, rejoindre 4 μl Le surnageant,40 μl Réactif deux,40 μl Réactif trois, après mélange placé 37℃Isolation au bain - Marie 15 minutes;

Ajouter le réactif IV 120 μlAprès mélange à 510 nm Détermination de l'Absorbance, notéeA Déterminer le tube.Parmi eux, le tube standard et le tube vierge ne doivent faire qu'un tube, le tube de détermination et le soin de chaque échantillon doivent être faits.

Remarque: les tubes vierges et les tubes standard ne doivent être déterminés qu'une seule fois.

AKP/ALP Calcul de l'activité:

1. Dans le sangAKP/ALP Calcul de vitalité

Définition des unités actives:37℃Production catalytique par millilitre de sang par minute 1 μmol Phénol défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.

AKP/ALP 活力(μmol/min) par ml) = [C] Produits standard× A Tube de détermination- A Soins aux÷(A) Tubes Standard- A Tube vide×V Anti - Total] ÷V L'échantillon

÷T=6,8×(A) Tube de détermination- A Soins aux÷(A) Tubes Standard- A Tube vide) et

2. Dans les tissus, les bactéries ou les cellulesAKP/ALP Calcul d'activité

（1）Calculé selon la concentration en protéines

Définition des unités actives:37℃Production catalytique par milligramme de protéine par minute 1 μmolPhénol défini comme 1 Une unité enzymatique vivante. AKP/ALP (μmol/min/mg) prot)=[C] Produits standard× A Tube de détermination- A Soins aux÷(A) Tubes Standard- A Tube vide×V Anti - Total]÷(Cpr×VL'échantillon÷T=6,8×(A)Tube de détermination- ASoins aux÷(A)Tubes Standard- ATube vide÷Cpr

（2）Calculé selon la qualité de l'échantillon

Définition des unités actives:37℃Production catalytique par minute par gramme de tissu 1 μ mol Phénol défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.

AKP/ALP (μmol/min/g) Poids frais)=[C Produits standard× A Tube de détermination- A Soins aux÷(A) Tubes Standard- A Tube vide×V Anti - Total] ÷(L×V L'échantillon÷VTotal des échantillons÷T=6,8×(A)Tube de détermination- ASoins aux÷(A)Tubes Standard- ATube vide÷W

（3）Calculé par nombre de bactéries ou de cellules

Définition des unités actives:37℃Dans chaque 10⁴ Production catalytique d'une bactérie ou d'une cellule par minute 1 μmolPhénol défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.AKP/ALP (μmol/min/10)⁴ cellule) =[C] Produits standard× A Tube de détermination- A Soins aux÷(A) Tubes Standard- A Tube vide×V Anti - Total] ÷ (Nombre de cellules× V L'échantillon÷V Total des échantillons÷T = 6,8×(A)Tube de détermination- ASoins aux÷(A)Tubes Standard- ATube vide) ÷Nombre de cellules

C Produits standard:2 μmol/ml;V Total inverse: volume total du système réactionnel (ml),205μl = 0,205ml; CPR: concentration en protéines du liquide enzymatique brut(mgpar ml) et，Besoin d'une détermination supplémentaire, il est recommandé d'utiliser les produits de cette société BCAKit de détermination de la teneur en protéines;W : qualité de l'échantillon;VÉchantillon: volume de surnageant ajouté au système réactionnel (ml),0.004ml;Véchantillon total: volume de liquide extrait,1 ml;T: temps de réaction (min),15 minutes- Oui.

Précautions:

1. Le réactif II, le réactif III et le réactif IV doivent être conservés à l'abri de la lumière.

2. Le réactif ne peut plus être utilisé après avoir changé de couleur bleu - Vert.

3. Il doit être mélangé immédiatement après l'ajout du réactif quatre, sinon le rendu des couleurs n'est pas WanTout- Oui.

Kit de détermination de l'activité de la phosphatase alcaline estérase Series