Kit de détermination de la teneur en protéines par la méthode du biuret instructions

Méthode des traces 100T/96S

Remarque: sélection avant détermination formelle 2 - 3 Un échantillon avec de grandes différences attendues fait des prédictions, assurant la concentration de protéines dans 1 à 10 mg/ml portéeÀ l'intérieur.

Détermination de la signification:

La teneur en protéines solubles de l'échantillon est souvent utilisée dans le calcul de l'activité enzymatique. En outre, la teneur en protéines solubles est également utilisée pour des analyses de qualité telles que les aliments.

Principe de détermination:

En solution alcaline forte, le biuret est associé à CuSO4 Formation d'un complexe violet; La nuance de couleur du complexe violet est directement proportionnelle à la concentration en protéines, tandis queLe poids moléculaire des protéines et la composition en acides aminés ne sont pas pertinents, ils peuvent donc être utilisés pour déterminer la teneur en protéines. La gamme de détermination de la méthode est 1 ~ 10mg Protéine, pour les échantillons avec une forte concentration de protéines, en particulier les matières animales.

Kit de détermination de la teneur en protéines par double urée - standing spot

Composition:

Standard: liquide 1 ml × 1 Les bouteilles,5 mg/ml à 4°CPréserver.

Instruments et fournitures autonomesPour:

Centrifugeuse, spectrophotomètre visible/ jauge enzymatique, cuve colorimétrique à traces de quartz / 96 Plaque à puits, pipette et eau distillée.

Les paramètres du produit spécifique sont soumis aux paramètres de la description du produit reçu

Extraction de protéines solubles dans l'échantillon:

1, échantillon liquide:Un échantillon liquide incolore clarifié peut être déterminé directement.

2, échantillon d'organisation:Par qualité organisationnelle (G): volume de liquide extrait (ML)pour 1: 5 à 10 Proportion (Recommander de prendre rendez - vous 0.1g Organisation, adhérer 1 mlExtrait (autonome, en utilisant un tampon d'extraction enzymatique ou de l'eau distillée ou physiologique au besoin)))

Homogénat de bain de glace,8000g à 4°CCentrifugation 10min， Prélever, c'est - à - dire mesurer le liquide. (les échantillons animaux doivent souvent être dilués) et

3 , bactéries, champignons: par nombre de cellules (104): volume de liquide extrait (en ml)pour Ratio de 500 ~ 1000: 1 (conseil 5 millions de cellulesAdhérer 1 ml Extrait liquide), bain de glace ultrasons briser les cellules (puissance 300w, ultrasons 3 Secondes, intervalles 7 Secondes, temps total 3 minutes);puis 8000g，

4℃, centrifugation 10 minutesPrendre sur la glace à mesurer.

Opération de détermination:

1. Spectrophotomètre/Préchauffage de l'étalon enzymatique 30 min, régule la longueur d'onde à 540 nmL'eau distillée est mise à zéro.

2. Tube vide:取 0,5 ml EP Tube, rejoindre 40 μl Eau distillée,200 μl Réactif un, laisser reposer à la température ambiante après mélange 15 min， 取 200 μl à microVerrerie colorimétrique/ 96 Plaque de trou,540 nm Colorimétrique, Notez commeA Tube vide.

3. Tube Standard:取 0,5 ml EP Tube, rejoindre 40 μl Liquide standard,200 μl Réactif un, laisser reposer à la température ambiante après mélange 15 min， 取 200 μl En verre micrométrique/ plaque 96 puits, 540 nmColorimétrique, Notez comme Un tube standard.

4. Tube de détermination:取 0,5 ml EP Tube, rejoindre 40 μl Liquide à mesurer,200 μl Réactif un, laisser reposer à la température ambiante après mélange 15 min， 取 200 μl à microVerrerie colorimétrique/ 96 Plaque de trou,540 nm Colorimétrique, Notez commeA Déterminer le tube.

Remarque: les tubes vierges et les tubes standard ne doivent être déterminés qu'une seule fois.

Formule de calcul de la concentration de protéines dans l'échantillonPour:

C À mesurer (mg/ml)=C Tubes Standard× A Tube de détermination -A Tube vide÷(A) Tube standard -A Tube vide) et

= 5×(A) Tube de détermination -A Tube vide÷(A) Tube standard -A Tube vide) et

PrécautionsPour:

1. La concentration de protéine de l'échantillon doit être 1 à 10 mg/mlDans la gamme, en dessous de 1 mg/mlNe peut pas utiliser cette méthode, au - dessus de 10 mg / ML doit être dilué en conséquence. Ainsi mesuréUtiliser avant 1 à 2Les échantillons sont pré - expérimentaux pour s'assurer que la concentration en protéines est De 1 à 10 mg / ML.

2. Extrait protéique de l'échantillon à tester disponible en solution saline physiologique, bi - vapeur ou sans protéine PBS Extraction. Cette méthode est soumise au sulfate d'ammonium,Tris Interférence du tampon, levéeLe prélèvement doit être exempt de ces substances; Sinon utiliser à la placeKit de détermination de la teneur en protéines BCA.

Kit de détermination de la teneur en protéines par double urée - standing spot