Carboxylestérase (CarE) etDescription du kit de détermination de l'activité

Méthode des traces 100T/96S

Toujours prendre avant la détermination officielle 2 - 3 Un échantillon avec de grandes différences attendues fait des prédictionsDétermination de la signification:

MammifèresCarE, également estérase aliphatique (aliestérase), largement distribué dans les tissus et les organes, appartient à la famille des hydrolases acides de soie.CarECatalyser l'hydrolyse des substances endogènes et exogènes contenant des liaisons ester, amide et Thioester, mais pas l'hydrolyse catalytique des bases acétyldan et de leurs analogues.CarE Impliqués dans le transport et le métabolisme des lipides et liés à la détoxification et au métabolisme de nombreux médicaments, poisons environnementaux et cancérogènes, les pesticides organophosphorés peuvent se lier etInhibitionCarEActivité.

Principe de détermination:

CarE Peut catalyser l'acide acétique- 1 -Les esters de naphtalène donnent des esters de naphtalène, le panier solide rend la couleur; Dans 450 nm Taux d'augmentation de l'absorption lumineuse, calculéCarE Activité.

Kit de détermination de l'activité carboxylestérase (CARE)

Composition:

Réactif III: poudre× 2 Branches, 4℃Conserver, prendre avant utilisation 1 Réactif trois, plus 0,6 ml L'éthanol anhydre est suffisamment dissous; Réactif IV: poudre× 2Branches,-20℃Conserver, prendre avant utilisation 1 Réactif quatre, plus une petite quantité de réactif deux pour dissoudre;

Formulation du liquide de travail: avant utilisation, vers 1 Flacon de réactif II, ajouter le réactif trois et le réactif quatre après dissolution chacun 1 Branchement, dissolution adéquate, filtration,4℃Protégé de la lumière, disponible 1 Semaine.

Les paramètres du produit spécifique sont soumis aux paramètres de la description du produit reçu

Instruments et fournitures propres:

Spectrophotomètre visible, centrifugeuse de table, pipette réglable,1 ml Verre colorier, mortier, glace et eau distillée.

Extraction du liquide enzymatique brut:

Bactéries, préparation d'échantillons cellulaires

Recueillir les bactéries ou les cellules à l'intérieur du tube de centrifugation, après la centrifugation pour éliminer; Selon chaque 200 Dix mille bactéries ou cellules ajoutées 400 μl Réactif I, bactéries ou cellules brisées par ultrasons (puissance 20% ultrasons 3s, intervalle 10 ans, répétitions 30 Sous);12000g à 4 ℃Centrifugation 30 minutesPrélever le surnageant à mesurer.

2Organisation: selon la qualité de l'Organisation (g): un volume de réactif(ml)pour 1Pour:5 à 10 Proportion (Recommander de prendre rendez - vous 0.1g Organisation, adhérer 1 ml Réactif i) réaliser un homogénat de bain de glace;12000g à 4 ℃Centrifugation 30 minutesPrélever le surnageant à mesurer.

3Liquide: détermination directe

Opération de détermination:

1. Spectrophotomètre/Préchauffage de l'étalon enzymatique 30 minutes, régule la longueur d'onde à 450 nmL'eau distillée est mise à zéro.

2. Réactif deux placé 37℃Préchauffage au bain - Marie 30 min- Oui.

3. Tube vide:Prendre des traces de verrerie colorimétrique/ 96 Plaque de trou, à ajouter à son tour 5 μl Eau distillée et 200 μl Réactif deux, mélange rapide, en 450 nm Mesurer sur placefixe 3 minutesVariation de la valeur de l'absorption lumineuse interne, art. 10 ansLa valeur d'absorption lumineuse est notée commeA1， 第 190sLa valeur d'absorption lumineuse est notée commeA2- Oui.△ATube vide= A2-A1

4. Tube de détermination:Prendre des traces de verrerie colorimétrique/ 96 Plaque de trou, à ajouter à son tour 5 μl Surnageants et 200 μl Réactif deux, mélange rapide, en 450 nm Mesurer sur place

fixe 3 minutes Variation de la valeur de l'absorption lumineuse interne, art. 10 ans La valeur d'absorption lumineuse est notée commeA3， 第 190s La valeur d'absorption lumineuse est notée commeA4- Oui.△A Tube de détermination=A4-A3

Remarque: les tubes vierges ne doivent être déterminés qu'une seule fois.

CarE Formule de calcul de l'activité:

a.La formule de calcul pour la détermination à l'aide d'une boîte colorimétrique de quartz à l'état de traces est la suivante:

1Dans l'OrganisationCarE Activité

（1）Calculé par concentration en protéines

CarE Définition des unités actives: parmg Les protéines tissulaires en 37℃Augmentation de la valeur d'absorption catalytique de la lumière par minute dans le système réactionnel 1 Défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.

CarE Activité enzymatique(U/mg) prot) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide) et× V Anti - Total÷(Cpr×V) L'échantillon÷T

=13,67 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷Cpr

（2）Calculé par poids frais de l'échantillon

CarE Définition des unités actives: parg Organisation en 37℃Augmentation de la valeur d'absorption catalytique de la lumière par minute dans le système réactionnel 1 Défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.

CarE Activité enzymatique(U/g) Poids frais) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide) et× V Anti - Total×(V Total des échantillons÷V L'échantillon) et÷W÷T

= 13,67 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷W 2Dans les bactéries ou les cellulesCarEActivité

CarE Définition des unités actives: par 1 Dix mille bactéries ou cellules 37℃Augmentation de la valeur d'absorption catalytique de la lumière par minute dans le système réactionnel 1 Défini comme unCarE Vivant

Unités sexuelles.

CarE Activité enzymatique(U/10⁴ cellule) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide) ×V Anti - Total×(V Total des échantillons÷V Le genre)÷Densité cellulaire (10⁴ cellule/ml) et

÷T=13,67×(△A Tube de détermination-△A Tube vide) ÷Densité cellulaire (10⁴ cellule/ml) et 3Dans le liquideCarEActivité

CarE Définition de l'unité d'activité: par ml d'échantillon 37℃Augmentation de la valeur d'absorption catalytique de la lumière par minute dans le système réactionnel 1 Défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.

CarE Activité enzymatique(U/ml) ) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide) et× V Anti - Total÷V L'échantillon÷T

= 13,67 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide) et

V Anti - Total: volume total du système réactionnel,205μl = 2,05 × 10^-4L;V échantillon total: volume total de surnageant,1 ml;V Exemple: ajouter le volume de surnageant(ml),

0.005 ml;CPR: concentration en protéines,mg/ml;W: qualité de l'échantillon (g);T: temps de réaction (min),3 minutes- Oui.

b.utiliser 96 La formule de calcul pour la détermination de la plaque à trous est la suivante:

1Dans l'OrganisationCarE Activité

（3）Calculé par concentration en protéines

CarE Définition des unités actives: parmg Les protéines tissulaires en 37℃Augmentation de la valeur d'absorption catalytique de la lumière par minute dans le système réactionnel 1 Défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.

CarE Activité enzymatique(U/mg) prot) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide) et× V Anti - Total÷(Cpr×V) L'échantillon÷T

=13,67 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷Cpr

（4）Calculé par poids frais de l'échantillon

CarE Définition des unités actives: parg Organisation en 37℃Augmentation de la valeur d'absorption catalytique de la lumière par minute dans le système réactionnel 1 Défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.

CarE Activité enzymatique(U/g) Poids frais) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide) ×V Anti - Total×(V Total des échantillons÷V L'échantillon) et÷W÷T

= 13,67 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide÷W 2Dans les bactéries ou les cellulesCarEActivité

CarE Définition des unités actives: par 1 Dix mille bactéries ou cellules 37℃Augmentation de la valeur d'absorption catalytique de la lumière par minute dans le système réactionnel 1 Défini comme unCarE Vivant

Unités sexuelles.

CarE Activité enzymatique(U/10⁴ cellule) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide) et× V Anti - Total×(V Total des échantillons÷V Le genre)÷Densité cellulaire (10⁴ cellule/ml) et

÷T=13,67×(△A Tube de détermination-△A Tube vide) ÷Densité cellulaire (10⁴ cellule/ml) et

3. Dans le liquideCarE Activité

CarE Définition de l'unité d'activité: par ml d'échantillon 37℃Augmentation de la valeur d'absorption catalytique de la lumière par minute dans le système réactionnel 1 Défini comme 1 Une unité enzymatique vivante.

CarE Activité enzymatique(U/ml) ) = (△A Tube de détermination-△A Tube vide) et× V Anti - Total÷V L'échantillon÷T

= 13,67 × (△A Tube de détermination-△A Tube vide) et

V Anti - Total: volume total du système réactionnel,205μl = 2,05 × 10^-4L;V échantillon total: volume total de surnageant,1 ml;V Exemple: ajouter le volume de surnageant(ml),

0.005 ml;CPR: concentration en protéines,mg/ml;W: qualité de l'échantillon (g);T: temps de réaction (min),3 minutes- Oui.

Kit de détermination de l'activité carboxylestérase (CARE)